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技術(shù)文章

原代細(xì)胞增殖生長(zhǎng)數(shù)值的步驟

閱讀:104          發(fā)布時(shí)間:2018-4-17

測(cè)定原代細(xì)胞增長(zhǎng)數(shù)值常用zui簡(jiǎn)便的方法。

一般過(guò)程為

1. 接種21 孔/24 孔板細(xì)胞(如用培養(yǎng)瓶時(shí)則21 瓶)。

2. 分7 組,每組3 孔(或瓶),培養(yǎng)一周(7 天),期間逐日檢測(cè)一組,計(jì)數(shù)。

3. 把7 天中的細(xì)胞數(shù)值繪成圖,即為細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
實(shí)驗(yàn)材料    
細(xì)胞
試劑、試劑盒    
胰蛋白酶
儀器、耗材    
吸管
實(shí)驗(yàn)步驟    1. 懸液制備

取待測(cè)生長(zhǎng)狀態(tài)良好細(xì)胞,增長(zhǎng)至接近匯合時(shí),向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加1 ml升0.25 %胰蛋白酶液,37 ℃溫箱中消化,至細(xì)胞接近脫離瓶壁前吸出消化液、加新的培養(yǎng)液、輕吹打制備成細(xì)懸液、計(jì)數(shù);

2. 接種

向每孔中接種等量細(xì)胞,置溫箱中培養(yǎng);把培養(yǎng)瓶中營(yíng)養(yǎng)液倒入試管中并記錄下毫升量;

3. 計(jì)數(shù)檢測(cè)

從次日起,即開(kāi)始檢測(cè)*組每個(gè)孔(或瓶)中的細(xì)胞總數(shù),用計(jì)算盤(pán)或用細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù),取3 個(gè)孔的均值,如此至第7 組結(jié)束;

4. 繪圖

用座標(biāo)圖紙繪成生長(zhǎng)曲線。
收起
注意事項(xiàng)    
1. 計(jì)數(shù)法簡(jiǎn)便易行,但不夠,約有20 %~30 %的誤差。為提高準(zhǔn)確性,每孔也應(yīng)計(jì)算2~3 次,則總和每組計(jì)算總次數(shù)達(dá)6 次~12 次,均值可能更為。

2. 原代細(xì)胞數(shù)量增加1 倍的時(shí)間稱倍增時(shí)間,亦可從細(xì)胞生長(zhǎng)曲線中測(cè)知。
Neotame Related Compound A    15mg    紐甜相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    
Nevirapine Anhydrous     100mg    無(wú)水奈韋拉平標(biāo)準(zhǔn)品    129618-40-2 
Nevirapine Hemihydrate     100mg    半水奈韋拉平標(biāo)準(zhǔn)品    129618-40-2 
N-Glycolylneuraminic Acid     200mg    N-羥乙酰神經(jīng)氨酸標(biāo)準(zhǔn)品    1113-83-3 
Niacin    200mg    煙酸標(biāo)準(zhǔn)品    59-67-6
Niacinamide (Vitamin B3)    500mg    煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品    98-92-0 
Nicotine Bitartrate Dihydrate     500mg    二水合重酒石酸尼古丁標(biāo)準(zhǔn)品    6019/6/3
Nifedipine     125mg    硝苯地平標(biāo)準(zhǔn)品    21829-25-4 
Nimodipine     125mg    尼莫地平標(biāo)準(zhǔn)品    66085-59-4 
Nitazoxanide    200mg    硝唑尼特標(biāo)準(zhǔn)品    55981-09-4 
原代細(xì)胞

 

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