【2015版中國(guó)藥典-中藥篇】野菊花分析

■《中國(guó)藥典》 收載情況

【來(lái)源】　本品為菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥頭狀花序。秋、冬兩季花初開(kāi)放時(shí)采摘，曬干，或蒸后曬干。
【功能與主治】　清熱解毒，瀉火平肝。用于疔瘡癰腫，目赤腫痛，頭痛眩暈。
【含量測(cè)定】　蒙花苷照液相色譜法（通則0512)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸（26:23:1）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為334 nm。理論板數(shù)按蒙花苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
對(duì)照品溶液的制備：取蒙花苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇（必要時(shí)加熱）制成每1 mL含25μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備：取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.25 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100 mL，稱(chēng)定重量，加熱回流3小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 µL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

■野菊花藥材液相色譜方法的建立

【色譜行為描述】
　　《中國(guó)藥典》中野菊花的含量測(cè)定以蒙花苷為質(zhì)量評(píng)價(jià)依據(jù)，蒙花苷在InertsilODS-3（4.6×250mm，5μm）中的色譜行為是：在流動(dòng)相組成為甲醇-水-冰醋酸系統(tǒng)時(shí)，流動(dòng)相的比例對(duì)蒙花苷及其相鄰色譜峰的分離度有一定影響，流動(dòng)相比例為甲醇：水：醋酸=52:46:2時(shí)，其分離效果與分析時(shí)間合適，選擇甲醇的比例在48%~57%（v/v）之間均可獲得較好的分析效果；柱溫對(duì)蒙花苷的保留時(shí)間及其相鄰色譜峰的分離度有微小影響，經(jīng)考察建議溫度為30℃；流動(dòng)相中醋酸對(duì)蒙花苷的分離度及拖尾因子均無(wú)明顯影響，但對(duì)分析時(shí)間有一定的改變，在醋酸濃度2%（pH=2.01）時(shí)較為合適。推薦流動(dòng)相配比范圍：甲醇：水：冰醋酸（48~57）：（41~51）：（1~5），柱溫范圍：25~35℃。綜上所述，經(jīng)考察在流動(dòng)相甲醇-水-冰醋酸比例為52:48:2，柱溫30℃的色譜條件下能得到較滿(mǎn)意的分析效果。
　　野菊花在上述色譜條件下，采用Shim-pack VP-ODS色譜柱表現(xiàn)出和Inertsil ODS-3色譜柱相似的色譜行為，保留時(shí)間和柱效相當(dāng)。
樣品來(lái)源：　本品為菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥頭狀花序。秋、冬兩季花初開(kāi)放時(shí)采摘，曬干，或蒸后曬干。
對(duì)照品：　蒙花苷（成都曼斯特生物科技有限公司，批號(hào)：MUST-15101207，含量：99.51%）
對(duì)照品溶液的制備：　取蒙花苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇（必要時(shí)加熱）制成每1 mL含25μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備：　取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.25 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100 mL，稱(chēng)定重量，加熱回流3小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

推薦使用色譜條件：			儀器配置：
色譜柱：	InertsilODS-3 (4.6×250 mm，5 μm )		LC-20AD 高壓泵
流動(dòng)相：	甲醇-水-冰醋酸（26:23:1）		SPD-10AVP紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器
柱溫：	30℃		DGU-20A3脫氣機(jī)
檢測(cè)波長(zhǎng)：	334nm		CTO-10ASVP柱溫箱
流速：	1.0mL/min		SIL-10ADVP 自動(dòng)進(jìn)樣器
進(jìn)樣量：	20μL
*此條件同樣適用于Shim-pack VP-ODS(4.6×250 mm, 5 μm)，相關(guān)譜圖見(jiàn)附注1。

■蒙花苷對(duì)照品溶液：

■供試品溶液：

■蒙花苷標(biāo)準(zhǔn)曲線：

■蒙花苷的重復(fù)性：

序號(hào)	對(duì)照品（10μL）		樣品（20μL）
	t/min	峰面積	t/min	峰面積
1	13.041	1320558	12.924	1442579
2	13.083	1316741	12.950	1431804
3	13.020	1317305	13.013	1427972
平均值	13.048	1318201	12.960	1434118
RSD/%	0.24	0.16	0.35	0.53

附注1：Shim-pack VP-ODS (4.6×250mm，5μm )色譜柱用于野菊花分析

■蒙花苷對(duì)照品溶液：

■供試品溶液：

* 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部陳世忠教授課題組提供