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三聚氰胺多種方法比較
閱讀：2371 發(fā)布時間：2017-3-272007年3月, 美國發(fā)生多起因食用寵物食品而導致寵物中毒死亡事件。2008 年9月, 中國發(fā)生因食用三鹿嬰幼兒奶粉導致嬰幼兒產(chǎn)生腎結(jié)石病癥的嚴重事件。兩起事件的原因都是在食品或飼料中非法添加大劑量三聚氰胺。因此, 如何快速準確的分析食品和飼料中的三聚氰胺成為食品企業(yè)、食品管理機構(gòu)和廣大消費者密切關(guān)注的問題。
為確保三聚氰胺檢測結(jié)果的有效性，全面提高檢測實驗室對原料乳及奶粉中三聚氰胺檢測能力水平，測試平臺先后組織實施了5輪全國三聚氰胺快速檢測技術(shù)方法的現(xiàn)場統(tǒng)一測試評價活動，共測試評價了56種檢測技術(shù)或方法，有效推出液相色譜法、拉曼光譜法、膠體金試免疫層析法（膠體金速測卡法）、酶聯(lián)免疫法(ELISA試劑盒法) 4種三聚氰胺快速檢測方法。
本文對常用的三種三聚氰胺快速檢測方法：液相色譜法、酶聯(lián)免疫法和膠體金免疫層析法的原理、特點做簡單介紹并對其應用進行比較。
1. 液相色譜法
國家標準GB /T 224002008公布了原料乳中三聚氰胺快速檢測的液相色譜法（HPLC法）, 采用乙腈作為原料乳中的蛋白質(zhì)沉淀劑和三聚氰胺提取劑, 0. 2 um微孔濾膜過濾后供HPLC 測定。采用的色譜柱為強陽離子交換色譜柱, 流動相為乙腈??沖液( 10 mmo l/L 檸檬酸, 10 mmo l/L辛烷磺酸鈉, 調(diào)節(jié)pH 至3. 0 ),采用紫外/二極管陣列檢測器檢測, 定量限為 0. 3mg , 定量靈敏度提高, 且分析時間較短。HPLC法雖然應用普遍, 但存在一定的局限性, 樣品前處理過程復雜, 儀器昂貴,對檢測人員的要求高， 檢測成本高。 1.1 原理 用乙腈作為原料乳中的蛋白質(zhì)沉淀劑和三聚氰胺提取劑，強陽離子交換色譜柱分離，液相色譜-紫外檢測器/二極管陣列檢測器檢測，外標法定量。 1.2 主要試劑和材料
1.2.1 乙腈（CH3CN）：色譜純。
1.2.2 磷酸（H3PO4）。
1.2.3 磷酸二氫鉀（KH2PO4）。
1.2.4 三聚氰胺標準物質(zhì)（C3H6N6）：純度大于或等于99%。
1.2.5 三聚氰胺標準貯備溶液：1.00×103 mg/L。
1.3. 儀器
1.3.1 液相色譜儀：配有紫外檢測器/二極管陣列檢測器。
1.3.2 分析天平：感量0.0001 g 和0.01 g。
1.3.3 pH 計：測量精度±0.02 1.4 檢驗操作：按國標GB /T 224002008要求操作。
2. 酶聯(lián)免疫吸附法( ELISA)
酶聯(lián)免疫法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是在免疫熒光和組織化學基礎上發(fā)展起來的新技術(shù)。其主要是利用抗原與抗體的高特異性反應，通過合適的載體，使酶標抗原或抗體與待測樣品反應，形成酶標抗原抗體復合物，在相應的酶底物參與下，復合物上的酶催化底物使之水解成有色物質(zhì)。一定條件下，呈色物質(zhì)與待測物的含量直接相關(guān)，因此可以根據(jù)呈色物質(zhì)顏色的深淺，對待測樣品進行定性定量分析。
近幾十年, 國內(nèi)外已建立了數(shù)十種藥物殘留的ELISA 分析技術(shù), 檢測水平可達ng 甚至pg水平。一些發(fā)達國家已經(jīng)研制成商品化的檢測試劑盒用于快速檢測。近十多年來我國也研發(fā)出多種商品化的檢測試劑盒用于快速檢測。 酶聯(lián)免疫吸附法具有特異性高、靈敏度高、穩(wěn)定性好、操作簡單、成本低，并可同時對大批量樣品進行快速檢測的特點，目前廣泛應用于食品中獸藥、毒素檢測的初篩中。 08年中國出現(xiàn)“三聚氰胺奶粉事件”時，主要使用的進口三聚氰胺速測試劑盒，現(xiàn)在國內(nèi)也已研發(fā)出商品化的三聚氰胺速測試劑盒，試劑盒靈敏度0.01ppm,zui低檢測限為0.1ppm,已廣泛用于快速檢測。
2.1 原理 采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被三聚氰胺抗原，樣本殘留的三聚氰胺和微孔條上預包被的抗原競爭抗三聚氰胺抗體，加入TMB底物顯色，樣本吸光值與其殘留物三聚氰胺成負相關(guān)，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數(shù)，即可得出樣本中三聚氰胺的含量。
2.2 主要試劑、材料 三聚氰胺ELISA檢測試劑盒
2.3 儀器
2.3.1 獸藥殘留分析儀或酶標儀
2.3.2 分析天平：感量0.01g
2.4 檢驗操作：按三聚氰胺ELISA檢測試劑盒說明書要求操作。
3. 膠體金免疫層析技術(shù)
膠體金免疫層析技術(shù)（Colloidal Gold Immunochromatographic Assay ，GICA)是以膠體金為標記物的免疫層析技術(shù)，免疫層析 ( Immunochromatography, IC)技術(shù)是20世紀80年代發(fā)展起來的一種將免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)相結(jié)合的快速免疫分析方法。其原理是以條狀纖維層析材料為固相,借助毛細作用使樣品溶液在層析條上泳動,同時,使樣品中的待測物與層析材料上針對待測物的受體(如抗體或抗原)發(fā)生高特異、高親和性的免疫反應,層析過程中免疫復合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域(檢測帶) ,通過酶促顯色反應或直接使用可目測的著色標記物(如膠體金) ,短時間(5～10min內(nèi))便可得到直觀的實驗結(jié)果。
膠體金免疫層析技術(shù)不需進行結(jié)合標記物與游離標記物的分離,省去了繁瑣的加樣、洗滌步驟。因而這種分析技術(shù)操作簡單快速,分析結(jié)果清楚,易于判斷,且無須儀器。膠體金免疫層析技術(shù)在醫(yī)學上應用較多,在食品檢測領(lǐng)域的應用在近幾年才發(fā)展