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液相色譜法基線波動和基線漂移的問題總結(jié)
閱讀:16380 發(fā)布時間:2017-3-151.液相系統(tǒng)沒有平衡好,柱子里的流動相一直在變化,在檢測器里面的吸收就會一直變化,導致基線波動的發(fā)生;梯度時如果其實比例的流動相平衡時間過短也會造成基線波動;
2.實驗室環(huán)境不穩(wěn)定(比如溫度忽高忽低,氣流不斷變化等),這對于沒有柱溫箱或只有單向溫度變化的HPLC儀器的影響尤其明顯;即使有比較好的柱溫箱時,也要注意別讓空調(diào)的出風口一直對照儀器吹,那樣基線也可能會波動;此外實驗室有電磁干擾時,也有可能會導致此問題的發(fā)生;
3.檢測器的流通池被污染,造成吸收的不恒定,此時需要清洗流通池;
4.檢測器燈能量不足時,吸收會變得不穩(wěn)定,這時基線一般也不穩(wěn)定,特別是在低波長處尤為明顯;
5.當使用低波長檢測時,有時流動相會使用兩相或以上的等度,這時混合器的很小的混合比例的誤差都會被放大,很有可能會使基線發(fā)生波動,這時將流動相按比例混合到一個通道里時,一般都會使情況改善很多;
6.流動相里的有機相的截止波長要大于檢測波長20nm以上,這一點切記,比如甲醇的截止波長是210nm,乙腈是190nm。當使用230nm以下的檢測波長時,如果條件允許,使用乙腈,可以避免基線波動,其余類推;
7.儀器出現(xiàn)問題也會造成基線波動,比如(1)流動相過濾頭堵塞、入口主動閥濾芯污染、單向閥被污染物堵塞、泵頭有氣泡、比例閥出故障、系統(tǒng)流路漏液,比如管路裂開、peek接頭沒*連上色譜柱而導致的泄露等;
8.沒有脫氣機的儀器,當流動相未脫氣或脫氣未*時,基線也會波動;有脫氣機的每次使用前都要檢查一下是否正常工作;
9.當大家使用梯度作為組分洗脫方式的時候,有條件的使用超純水,磷酸鹽、三乙胺等固體液體加入試劑也使用HPLC級別的,因為在梯度中隨著有機相(洗脫力較強)的不斷增加,流動相系統(tǒng)里的雜質(zhì)會在基線上反映出來,導致出現(xiàn)鬼峰或基線波動;
10.流動相中的有機相和緩沖液的比例一定要注意調(diào)配好,緩沖液的比例不能過大,要不然會出現(xiàn)緩沖鹽在柱子里析出的情況,這樣不但會造成基線波動的發(fā)生,甚至會造成色譜柱毀壞;
11.當色譜柱被污染時,也會造成基線波動,這里尤其要注意的是大家在做合成中控實驗的時候,不要用合成的原始反應液直接進樣,因為原液里面有很多非極性或極性很小的化合物,一旦進入到反相色譜柱里和非極性的C18發(fā)生相互作用,很可能就洗脫不下來使色譜柱變性或者慢慢的被洗脫下來,造成以后的分析出現(xiàn)不穩(wěn)定的鬼峰或者基線波動;
12.一些比較老的液相儀對電壓要求很高,電壓有點起伏檢測器就會反映教明顯,比如老的惠普和島津等儀器,這時需要配一個穩(wěn)壓電源來解決此問題;此外儀器和電腦之間連接的數(shù)據(jù)線出問題或老化也可能會使基線波動。