熒光分光光度計的結(jié)構(gòu)有哪些特點
熒光分光光度計與紫外分光光度計屬一類產(chǎn)品,結(jié)構(gòu)均由激發(fā)光源、單色器、樣品室、光電倍 增管和讀出(記錄)裝置所組成。但是它們光源是不同的,熒光分光光度計多采用高壓汞燈、氙燈和激光光源。同時,熒光測量多采用激發(fā)光和發(fā)射光成直角的光路,儀器組件的布置有所不同。
(1)激發(fā)光源:要比吸收法中光源強度大。
汞燈:發(fā)射強度大、穩(wěn)定,不需復雜電源,但譜線不連續(xù),數(shù)目少,主要用于濾片熒光計。
碘鎢燈:提供連續(xù)光譜300~700mn。
氙燈:發(fā)出射線的強度大,譜線連續(xù),分布于200~700 nm光域內(nèi),且在300~400nm 波段內(nèi)射線強度幾乎相等,但該燈的電源功率要求大,且電源穩(wěn)定,因此電源結(jié)構(gòu)復雜。
激光:發(fā)光強度大,能極大地提高熒光分析的靈敏度。
(2)樣品池:通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時,光源與檢測器成直角安排;測量固體時,光源與檢測器成銳角安排。低溫熒光測定時在一樣品池外套一個液氮的透明石英真空瓶。
(3)單色器:熒光分光計通常具有兩個濾光片:濾光片在光源與樣品池之間,濾去不需要的光,讓需要的激發(fā)光通過。第二濾光片在樣品池與檢測器之間,濾去溶劑散射 光、容器表面散射光、雜質(zhì)發(fā)出的光等,讓待測物質(zhì)發(fā)射的熒光通過。
熒光分光光度計通常具有兩個光柵,位置同濾光片,單色性好。
(4)檢測器:因熒光通常較弱,采用光電倍增管作檢測器,靈敏度高。選擇光電倍增管要考慮:響應(yīng)波長、靈敏度和嗓聲水平。 藍敏管對蛋白質(zhì)、核酸的測量適用,而紅敏管則適用于熒光染料檢測。
(5)顯示系統(tǒng):光度表、計算機操作系統(tǒng)等。