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一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?/p>

(1)掌握血液瓊脂培養(yǎng)基(血瓊脂培養(yǎng)基)的制備方法，明確血液瓊脂培養(yǎng)基的用途。

(2)鞏固掌握一般培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基的配制方法和原理。

二、基本原理

血液瓊脂培養(yǎng)基可用于分離營(yíng)養(yǎng)要求高的微生物。一些病原性真菌或放線菌等難養(yǎng)微生物，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高甚至十分苛刻，而動(dòng)物血是微生物生長(zhǎng)繁殖的優(yōu)良營(yíng)養(yǎng)物。研究證明，在45～50℃時(shí)加入血液可以保存其中某些不耐熱的生長(zhǎng)因子，促進(jìn)微生物生長(zhǎng)。血液瓊脂培養(yǎng)基也可用于溶血實(shí)驗(yàn)。

三、實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備

(1)培養(yǎng)基：牛肉膏朊胨培養(yǎng)基，見天然培養(yǎng)基——牛肉膏朊胨培養(yǎng)基的制備。

(2)儀器或其他用具：裝有5～10粒玻璃珠(Φ≈3mm)的無菌三角燒瓶、無菌注射器、無菌平皿等，其他儀器或用具與天然培養(yǎng)基——牛肉膏朊胨培養(yǎng)基的制備相同。

(3)動(dòng)物：健康的兔或羊。

四、操作步驟

(1)牛肉膏朊胨培養(yǎng)基的制備見天然培養(yǎng)基——牛肉膏朊胨培養(yǎng)基的制備部分。也可用豆粉瓊脂(pH=7．4～7．6)等營(yíng)養(yǎng)豐富的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制血液瓊脂培養(yǎng)基。

(2)無菌脫纖維兔血(或羊血)的制備：用配備18號(hào)針頭的無菌注射器以無菌操作抽取全血(即未經(jīng)處理的靜脈抽血)(無菌采血操作)，并立即注入裝有無菌玻璃珠(Φ≈3mm)的無菌三角燒瓶中，然后搖動(dòng)三角燒瓶1．0min左右，形成的纖維朊塊會(huì)沉淀在玻璃珠上，把含血細(xì)胞和血清的上清液傾人無菌容器即得到脫纖維兔血(或羊血)，置冰箱4℃存儲(chǔ)備用。

注意：整個(gè)過程必須嚴(yán)格無茵操作。制備脫纖維血液時(shí)，應(yīng)搖動(dòng)足夠時(shí)間以防凝固。也可以直接購買脫纖維兔血(或羊血)。

(3)血液瓊脂培養(yǎng)基的制備：將牛肉膏朊胨瓊脂培養(yǎng)基溶化，待冷卻至45～50℃時(shí)，以無菌操作方式，按10％(體積分?jǐn)?shù))的量加入無菌脫纖維兔血(或#血)于培養(yǎng)基中，立即搖蕩，以便血液和培養(yǎng)基充分混勻。根據(jù)具體情況，還可以考慮是否加入10g／L的葡萄糖。

45～50℃加入血液是為了保存其中某些不耐熱的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和保證血細(xì)胞的完整，以便于觀察細(xì)菌的溶血作用；同時(shí)，在這種溫度下瓊脂不會(huì)凝固。

(4)迅速以無菌操作倒入無菌平皿中，即成血液瓊脂平板，注意不要產(chǎn)生氣泡。

(5)置37℃培養(yǎng)箱24h，如無菌生長(zhǎng)即可使用。

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

(1)消毒、滅菌和除菌有何異同?請(qǐng)列表比較。

(2)高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、紫外線滅菌和微孔濾膜除菌有何異同?列表比較各自的特點(diǎn)和適用范圍。

(3)培養(yǎng)基制備的一般步驟和注意事項(xiàng)是什么?

(4)各種培養(yǎng)基成分的對(duì)于微生物生民的主要功能是什么?

(5)各種培養(yǎng)基的適用范圍是什么?列表比較牛肉膏朊胨培養(yǎng)基、高氏I號(hào)培養(yǎng)基、馬丁氏培養(yǎng)基和血液瓊脂培養(yǎng)基的成分、特點(diǎn)及應(yīng)用范圍。

(6)為何培養(yǎng)基制作一般選用瓊脂作為固定劑而不是其他物質(zhì)?瓊脂是*的固定劑嗎?有非瓊脂固定培養(yǎng)基嗎?

(7)培養(yǎng)基配制過程中，pH如何變化?究竟如何控制和獲得適宜的微生物培養(yǎng)pH?pH的調(diào)節(jié)會(huì)影響培養(yǎng)基的物理化學(xué)性質(zhì)嗎?

(8)請(qǐng)對(duì)照有關(guān)國家要求，比如WS 233—2002和GB 19489—2008等，如果開展血液瓊脂培養(yǎng)，注意實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)條件是否具備?

(9)盡管目前已經(jīng)有很多培養(yǎng)基的配方，但科學(xué)界普遍認(rèn)為，于實(shí)驗(yàn)條件和認(rèn)知水平所限，人類目前已知的微生物僅占所有微生物的1％，99％左右的微生物尚不為人類所知，請(qǐng)問原因是什么?你能否更新設(shè)計(jì)一種或多種培養(yǎng)基，來獲取和認(rèn)識(shí)更多的微生物?