1M 醋/乙酸鋰溶液 酵母
英文名:1M Lithium Acetate solution
描述：齊岳出品的酵母轉(zhuǎn)化試劑盒主要用于釀酒酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，該試劑盒遵循廣大用戶的使用習(xí)慣，分別提供PEG、LiAc和Carrier DNA溶液，PEG、LiAc均經(jīng)過濾，Carrier DNA經(jīng)優(yōu)化處理，更有助于質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化效率。該試劑盒可根據(jù)實(shí)際需要靈活配制1 × LiAc溶液和轉(zhuǎn)化預(yù)混液，既方便使用，又經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。
感受態(tài)細(xì)胞制備：
1.活化菌種。-80 ℃保存的菌種在YPDA培養(yǎng)基平板上劃線，30 ℃培養(yǎng)2-4天。
2.挑取酵母單菌落在YPDA培養(yǎng)基平板上劃3-5 mm的短線，30 ℃培養(yǎng)2-4天。
3.待酵母單菌落長至直徑2 mm時(shí)，把酵母細(xì)胞接種到3 mL YPDA液體培養(yǎng)基中，30 ℃過夜培養(yǎng)。
4.天轉(zhuǎn)接到含有30-50 mL YPDA液體培養(yǎng)基的三角瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，待OD6000.4-0.5，3000 rpm離心5 min，棄上清。
5.沉淀用30-50 mL的無菌的去離子水懸浮。3000 rpm離心5 min，棄上清。
6.沉淀用1.5 mL 1 × LiAc（150 μL 10 × LiAc Solution加1350 μL無菌水）重懸后轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，3000 rpm離心5 min，棄上清。
注意：10 × LiAc Solution經(jīng)過pH緩沖，添加TE作為緩沖劑。
7.加入1 mL 1 × LiAc重懸，小體積轉(zhuǎn)化按照每管100 μL分裝，用于文庫轉(zhuǎn)化不分裝。
8.3000 rpm離心5 min，棄上清，感受態(tài)細(xì)胞即制備完畢。
注意：制備好的感受態(tài)立即使用，在8步離心前，室溫放置不應(yīng)過5小時(shí)。
供應(yīng)產(chǎn)品列表：
| DO Supplement -His/-Met/-Ura |
| DO Supplement -His/-Trp |
| DO Supplement -Leu |
| DO Supplement -Leu/-Ile/-Val |
| DO Supplement -Leu/-Lys/-Trp |
| DO Supplement -Leu/-Met |
| DO Supplement -Leu/-Met/-Trp/-Ura |
| DO Supplement -Leu/-Met/-Ura |
| DO Supplement -Leu/-Ura |
| DO Supplement -Met |
| DO Supplement -Met/-Trp/-Ura |
| DO Supplement -Met/-Ura |
| DO Supplement -Ura |
| DO Supplement-Ade-His-Leu-Trp |
| DO Supplement -His/-Leu |
| DO Supplement-His/-Leu/-Met/-Trp |
| DO Supplement -His/-Leu/-Trp |
| DO Supplement-His/-Leu/-Trp/-Ura |
| DO Supplement-His/-Leu/-Ura |
| DO Supplement-His/-Trp/-Ura |
| DO Supplement -His/-Ura |
| DO Supplement-Leu/-Met/-Trp |
| DO Supplement -Leu/-Trp |
| DO Supplement-Leu/-Trp/-Ura |
| DO Supplement -Met/-Trp |
| DO Supplement -Trp |
| DO Supplement -Trp/-Ura |
| Total Yeast Culture Amino acid Premixed Powder |
| Total Yeast Culture Amino acid Premixed Powder |
酵母單雜交早是1993年由Li等從酵母雙雜交發(fā)展而來，通過對報(bào)告基因的表型檢測，分析DNA與蛋白之間的相互作用，以研究真核細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)調(diào)控。由于酵母單雜交方法檢測某些轉(zhuǎn)錄因子與順式作用元件專一性相互作用的敏感性和性，現(xiàn)已被用于克隆細(xì)胞中含量微弱的、用生化手段難以純化的某些轉(zhuǎn)錄因子。
酵母單雜交(Yeast one-hybrid)是根據(jù)DNA結(jié)合蛋白(即轉(zhuǎn)錄因子)與DNA順式作用元件結(jié)合調(diào)控報(bào)告基因表達(dá)的原理，克隆與靶元件結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子基因(cDNA)的方法。其理論基礎(chǔ)是：許多真核生物的轉(zhuǎn)錄子由物理和功能上的DNA結(jié)合區(qū)(DNA-binding domain BD)和轉(zhuǎn)錄區(qū)(Activation domain AD)組成，因此可構(gòu)建基因與AD的融合表達(dá)載體，在酵母中表達(dá)為融合蛋白時(shí)，根據(jù)報(bào)道基因的表達(dá)情況，便能篩選出與靶元件有結(jié)合區(qū)域的蛋白。理論上，在單雜交檢測中，靶元件都可被用于篩選一種與之有結(jié)合區(qū)域的蛋白。
雙雜交系統(tǒng)的建立得力于對真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過程的認(rèn)識。細(xì)胞起始基因轉(zhuǎn)錄需要有反式轉(zhuǎn)錄因子的參與。80年代的工作表明， 轉(zhuǎn)錄因子在結(jié)構(gòu)上是組件式的（modular）， 即這些因子往往由兩個(gè)或兩個(gè)以上相互的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中有DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA binding domain，簡稱為BD）和轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)域（activation domain，簡稱為AD），它們是轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮功能所的。單獨(dú)的BD雖然能和啟動(dòng)子結(jié)合，但是不能轉(zhuǎn)錄。而不同轉(zhuǎn)錄因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的轉(zhuǎn)錄的功能。如酵母細(xì)胞的Gal4蛋白的BD與大腸桿菌的一個(gè)酸性結(jié)構(gòu)域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結(jié)合到Gal4結(jié)合位點(diǎn)并轉(zhuǎn)錄。
齊岳生物供應(yīng)的產(chǎn)量和服務(wù)被多所院?？蒲袡C(jī)構(gòu)
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