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酶譜法的基本過程是先將樣品進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1%明膠）電泳分離，然后在有二價(jià)金屬離子存在的緩沖系統(tǒng)中使樣品中的MMP-2和MMP-9恢復(fù)活性，在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠，zui后用考馬斯亮藍(lán)將凝膠染色，再脫色，在藍(lán)色背景下可出現(xiàn)白色條帶，條帶的強(qiáng)弱與MMP-2和MMP-9活性成正比。

復(fù)性原理：在電泳過程中，SDS與樣品中的MMPs結(jié)合（當(dāng)然是可逆性結(jié)合），破壞其氫鍵、疏水鍵而使MMPs不能發(fā)揮其分解明膠的作用，而只有當(dāng)將膠置Trition中洗脫（是放在搖床上搖，30min/次，做2次或15min/次，4次。靜置于Trition中是不妥的。）時(shí)，由于SDS被Trition結(jié)合而去除，從而使MMPs恢復(fù)了活性。

基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌，活化后能夠降解 細(xì)胞外基質(zhì)的膠原蛋白，又稱膠原酶。通過影響細(xì)胞外基質(zhì)，膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組 織重塑等過程，并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經(jīng)等許多疾病過程。血漿與組織中的 MMP-2、MMP-9 參與各種生理與病理過程，其在診斷和治療中的意義日益受到重視。

本試劑盒采用酶譜法(zymography)檢測 MMP-2、MMP-9  活性。Zymography  是一種廣為使用的、基 于 SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達(dá) 1 nM，高于 ELISA 方法 2，其 基 本原理和程序是：制備加有膠原酶底物的 SDS-PAGE 凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電 泳， 電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng) Buffer 孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深 染，形 成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色 而形成透 亮區(qū)域，從而能同時(shí)指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液，可檢測少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶譜及活性，檢 測靈敏度~1 nM。試劑盒可進(jìn)行 50 次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測，如果小膠加樣孔為 10~15個(gè)，則總計(jì)可檢測 500~750 個(gè)樣品。

適用: 檢測 MMP-2、MMP-9 酶譜及活性（Detect MMP2 and MMP9 as low as 1 nM）。

 組成與儲(chǔ)存 (50 assays)：

1.2 × SDS-PAGE non-reducing buffer 1.5 ml µl, 20 ºC；
2.10 × Substrate G, 50 ml, 20 ºC；
3. 10 × Buffer A, 50 ml, 4 ºC, 使用時(shí)用蒸餾水稀釋；

4. 10 × Buffer B, 50 ml, 4 ºC, 使用時(shí)用蒸餾水稀釋；

5. SDS-PAGE 凝膠蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)染色液, 4 ºC。

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