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產(chǎn)品描述
　　李記生物研制的BCA蛋白定量試劑盒可對(duì)蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行高靈敏度比色定量，本試劑盒不受蛋白質(zhì)種類的影響。BCA(bicinchoninic acid)是一種穩(wěn)定的水溶性復(fù)合物，在堿性條件下，二價(jià)銅離子（Cu²⁺）可以被蛋白質(zhì)還原成一價(jià)銅離子（Cu⁺），一價(jià)銅離子可以和BCA相互作用，兩分子的BCA螯合一個(gè)一價(jià)銅離子，形成紫色的絡(luò)合物，該復(fù)合物為水溶性，在562nm處顯示強(qiáng)吸光性，在0.02～2 mg/mL濃度范圍內(nèi)蛋白質(zhì)濃度與吸光度值成線性關(guān)系，因此可以根據(jù)待測(cè)蛋白在562 nm處的吸光度計(jì)算待測(cè)蛋白濃度。
　　由于還原劑和螯合劑對(duì)反應(yīng)有阻礙，因此本制品不適用于含有還原劑（如：β－巰基乙醇，DTT等）或者螯合劑（如EDTA）的蛋白質(zhì)樣品的定量。對(duì)表面活性劑的干擾影響小?？捎糜诤斜砻婊钚詣┑鞍踪|(zhì)溶液的定量。
訂購(gòu)信息

產(chǎn)品組分

保存方法
　　冰袋運(yùn)輸，BCA試劑A和B室溫保存，蛋白標(biāo)準(zhǔn)請(qǐng)-20℃凍存。保質(zhì)期12個(gè)月。
使用方法

1. *融化蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，取適量蛋白標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至終濃度為0.5 mg/mL。蛋白樣品使用什么溶液溶解，標(biāo)準(zhǔn)品也應(yīng)用什么溶液稀釋，但是為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)，也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。將標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、8、12、16、20 μL加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20 μL，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL。
2. 根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5 mL BCA試劑A加100 μL BCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室溫24 h內(nèi)穩(wěn)定。
3. 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，也加稀釋液到20 μL。
4. 各孔加入200 μL BCA工作液，37℃放置20~30 min。也可以室溫放置2 h，或60℃放置30 min。
5. 測(cè)定A562吸光值，540~595 nm之間的波長(zhǎng)也可接受。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品的蛋白濃度。
   注意事項(xiàng)

1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品配制后可立即使用，也可以-20℃長(zhǎng)期保存。
2. BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育或適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間以獲得更好檢測(cè)效果。
3. 因?yàn)檠娱L(zhǎng)孵育時(shí)間會(huì)引起吸光值的變化，所以在用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)時(shí)，應(yīng)盡可能加快檢測(cè)速度，以免先檢后檢產(chǎn)生系統(tǒng)誤差。
4. 標(biāo)準(zhǔn)蛋白液的加量應(yīng)當(dāng)準(zhǔn)確，如果加量不準(zhǔn)確，會(huì)導(dǎo)致制作出來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)曲線出現(xiàn)偏差，影響待測(cè)樣品的濃度計(jì)算，所以一方面需要用梯度稀釋的方法來(lái)配置標(biāo)準(zhǔn)蛋白液，另一方面應(yīng)使用準(zhǔn)確度高的移液槍。
    

 
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