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高GC納米PCR試劑盒上海滬崢

產(chǎn)品目錄號(hào)：NHS21-5

高GC納米PCR試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明：本試劑盒既適用于高GC序列的擴(kuò)增，也適用于一般PCR擴(kuò)增。產(chǎn)品定位于解決目前市場(chǎng)上難于擴(kuò)增的若干PCR反應(yīng)。納米PCR是納米材料輔助的基因擴(kuò)增技術(shù),研究表明某些納米材料可以增強(qiáng)基因擴(kuò)增的總體效率。

高GC納米PCR試劑盒25ul/250次   配置如下：

2×NanoPCR buffer 11-1 (1000ul)；

2×NanoPCR buffer 11-2 (1000ul)；

2×NanoPCR buffer 11-3 (1000ul)；

dNTPs (2.5mM)(300ul)；

MgCl₂ (25 mM) (500ul)；

Taq DNA polymerase (5 U/ul) (60ul)

使用建議:

• 納米材料容易聚集，每次使用前請(qǐng)震蕩均勻再使用。PCR產(chǎn)物中含有的納米材料一般不影響電泳等后續(xù)操作。
• 一個(gè)典型的PCR反應(yīng)（舉例：擴(kuò)增一個(gè)高GC片段780bp）設(shè)計(jì)如下：

PCR程序舉例：[94℃-5min]；[94℃-30s，56℃-30s，72℃-40s]×35 cycles（循環(huán)數(shù)可按照PCR產(chǎn)物的多少適當(dāng)調(diào)節(jié)）；[72℃-5min]. 如果不確定*退火溫度，可以先做梯度PCR確定*退火溫度。

• 批量PCR需要計(jì)算并規(guī)劃好實(shí)驗(yàn)中所需要混合的mix總量以及需要單獨(dú)加入PCR體系中的成分和加量。例：做以不同基因組為模板的9管12ul體系的PCR。計(jì)入加樣損耗，按10管加量計(jì)算。試驗(yàn)操作全過(guò)程建議在冰盒上進(jìn)行。

按照上表所描述的將mix做好，并反復(fù)搖晃15-20下、上下振蕩后離心（大約待離心機(jī)轉(zhuǎn)到7000rpm隨即停下來(lái)就好），離心后，用槍頭分別加入相應(yīng)基因組0.2ul的PCR管內(nèi)，每管11.8ul并用槍頭順便混合3下使均勻。放入PCR儀進(jìn)行PCR。

實(shí)驗(yàn)舉例1：擴(kuò)增以人類基因組為模板的38對(duì)序列引物。該38對(duì)高GC擴(kuò)增產(chǎn)物GC>60%,大小均在700-800bp左右。38對(duì)退火溫度基本*。使用上述12ul擴(kuò)增體系， 使用NanoPCR試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增的圖片如圖1所示。

圖1 使用NanoPCR試劑盒擴(kuò)增人類基因組38對(duì)引物的電泳圖片

Marker為λ/Hind Ⅲ.

圖2 使用國(guó)外某公司高GC試劑盒擴(kuò)增人類基因組38對(duì)引物的電泳圖片

圖3  使用國(guó)內(nèi)某公司高GC試劑盒擴(kuò)增人類基因組38對(duì)引物的電泳圖片

參考文獻(xiàn)：

Haikuo Li etal.  Nanoparticle PCR: Nanogold-assisted PCR with enhanced specificity. Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44(32):5100-3

Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanopowder enhances the efficiency of polymerase chain reaction. Nanotechnology, 18 (2007) 355706

Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanotubes enhances the efficiency of long PCR. 2008, Biotechniques, 44(4):537-545

保存溫度：-20℃

保質(zhì)期：12個(gè)月

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