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Rubicon PicoPLEX 低深度測序法檢測單細胞CNV
閱讀：2720發(fā)布時間：2018-5-18
參考文獻：
低深度測序在檢測單細胞染色體微小變異中的應用探索
陳大洋1 甄賀富2 劉萍2 邱詠2 謝林2 劉弘泰1 陳芳2
（1. 中國科學院大學華大教育中心，深圳 518083 ；2. 深圳華大基因研究院，深圳 518083）生物技術通報 BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2016, 32(12):58-64
生物技術通報影響力：雙核心期刊[（2017年中國科技核心期刊目錄）][中國科學引文數(shù)據(jù)庫來源期刊列表（2017—2018 年度）]
文章介紹
測序目的：低深度測序在檢測單細胞 CNV方面的可行性。
單細胞測序對象：經(jīng)過比較基因組雜交（array CGH，aCGH）檢測的5例陽性細胞系
單細胞全基因組擴增方法：Rubicon Genomics 公司的 PicoPLEX® WGA Kit和另一種商業(yè)試劑盒。
單細胞測序深度：數(shù)據(jù)量為 0.1 X
測序結果：Rubicon 試劑盒具有較好的均勻性。
分析原因：Rubicon 試劑盒先以原始基因組為模板進行復制，經(jīng)過 12 次循環(huán)后，再以擴增產(chǎn)物為模板進行擴增可有效降低擴增誤差，增加保真性。
原文摘要：旨在探討低深度測序在檢測單細胞染色體微小變異中的應用。以經(jīng)過比較基因組雜交（array CGH，aCGH）檢測的5例陽性細胞系為研究對象，從中分離的單細胞分別用兩種單細胞擴增試劑盒進行擴增，采用Hiseq2000測序平臺進行全基因組測序，然后進行生物信息學分析，將檢測結果與已被 aCGH 證實的結果進行比較。結果顯示，5 個單細胞的全基因組擴增成功，通過低深度測序均獲得明確的檢測結果。在用 GenomePlex® Single Cell WGA Kit 試劑盒的處理中檢出區(qū)域與 aCGH 檢測區(qū)域均有 80% 以上的重疊，1 個樣本檢出了 8 Mb（Megabase）左右的假陽性 ；在用 PicoPLEX® WGA Kit 試劑盒處理時檢出信號與 aCGH 區(qū)域也有 80%以上的重疊且無假陽性信號產(chǎn)生。證實在數(shù)據(jù)量為 0.1 X 左右時可以檢出單細胞染色體上 7 Mb 以上的拷貝數(shù)變異。
PicoPLEX® WGA Kit單細胞全基因組擴增試劑盒介紹
PicoPLEX WGA Kit被IVF行業(yè)供應商如BlueGnome信賴并用于胚胎植入前遺傳學篩查和診斷(PGS/PGD)。
英文名稱：Rubicon PicoPLEX WGA Kit
中文名稱：Rubicon PicoPLEX單細胞全基因組擴增試劑盒
品牌：Rubicon Genomics
貨號：R30050或RB3050（TAKARA版）
用途：卵裂球和滋養(yǎng)外胚層細胞的植入前基因篩查（PGS）和需要單細胞擴增的循環(huán)腫瘤細胞（CTC）中的CNV檢測。
從單細胞中擴增DNA構建高重復性的文庫現(xiàn)在成為可能！PicoPLEX WGA kit采用技術，設計、優(yōu)化用于從單細胞中擴增單拷貝基因組DNA。便捷的單管操作流程減少了手動操作的失誤，縮短了獲得結果的時間并降低背景。PicoPLEX WGA Kit同樣也可用于6 pg至50 pg的純化gDNA，并兼容微陣列比較基因組雜交（array CGH）分析及PCR。
PicoPLEX技術概要
PicoPLEX全基因組擴增技術具有高穩(wěn)定性和可再現(xiàn)性，已經(jīng)成為PGS的標準擴增技術。
技術要點：利用隨機引物引發(fā)線性擴增進行全基因組擴增。即先以原始基因組為模板進行復制，經(jīng)過多次循環(huán)后，再以擴增產(chǎn)物為模板進行擴增可有效降低擴增誤差，增加保真性。
名詞解釋：
拷貝數(shù)變異（copy number variations，CNVs）：CNV 是 指 與 參 照 基 因 組 比 較，1
kb-1 Mb 的 DNA 片段的缺失、插入、重復、倒位和復雜多位點的變異。
華雅旗下紅榮微再主營醫(yī)療核酸保存文庫擴增等產(chǎn)品，授權代理(上海）Rubicon Genomics單細胞文庫擴增試劑。
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