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CAR-T 細(xì)胞治療：負(fù)選EasySep Enrichment Kit
閱讀：4895發(fā)布時間：2018-1-18
CAR-T 治療：T細(xì)胞分選EasySep™ Human T Cell Enrichment Kit
免疫細(xì)胞治療
人免疫系統(tǒng)（immune system）是防衛(wèi)病原體入侵zui有效的武器，具有以下功能：
免疫防御：識別和清除外來入侵的抗原，如病原微生物等。
免疫監(jiān)視：識別和清除體內(nèi)發(fā)生突變的腫瘤細(xì)胞或其他有害的成分。
免疫自穩(wěn)：識別和清除體內(nèi)變性、衰老、死亡的細(xì)胞，維持體內(nèi)環(huán)境相對穩(wěn)定。
免疫細(xì)胞治療是一種將患者自體的免疫細(xì)胞在體外培養(yǎng)、活化、擴(kuò)增，再回輸入患者體內(nèi)，利用患者自身免疫細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞進(jìn)行治療的生物治療技術(shù)。
免疫細(xì)胞治療惡性腫瘤一直是醫(yī)學(xué)界研究的熱點，相對于傳統(tǒng)腫瘤治療（手術(shù)、化療、放療），優(yōu)勢已經(jīng)越來越明顯，在一些腫瘤疾病類型上，甚至已經(jīng)取代傳統(tǒng)的治療手段，成為一線治療方法，比如這幾年的研究大熱點CAR-T治療，在治療血液性腫瘤上面取得了突破性的成績，國內(nèi)外制藥大公司注冊的CAR-T臨床試驗高達(dá)百個。
免疫細(xì)胞
CAR-T細(xì)胞 NK細(xì)胞 CIK細(xì)胞
CAR-T免疫細(xì)胞治療模式
CAR-T免疫細(xì)胞療法流程的相關(guān)階段
病人來源的T細(xì)胞樣本（PBMC等）——T細(xì)胞分離分選——CAR-T細(xì)胞活化、擴(kuò)增，基因工程改造——CAR-T細(xì)胞回輸
CAR-T是一種通過基因工程改造T細(xì)胞對白血病的血液腫瘤細(xì)胞進(jìn)行攻擊的免疫療法。截止去年十月，已有諾華和Kite兩家公司獲得FDA認(rèn)證的唯二基因療法。CAR-T免疫細(xì)胞療法大熱中。這兩個臨床成功的CAR-T療法都對來自病人的外周血進(jìn)行磁珠分選篩選T細(xì)胞。Stemcell的EasySep™人T細(xì)胞富集分選試劑盒可以用于CAR-T療法的T細(xì)胞分選階段（免疫磁珠細(xì)胞分選法）。EasySep™人T細(xì)胞富集分選試劑盒的磁珠分選采用負(fù)選方式，可以避免標(biāo)記T細(xì)胞，以防標(biāo)記抗體對T細(xì)胞造成傷害，zui大程度保持T細(xì)胞的untouched活性，立即用于下游CAR-T研究。
T細(xì)胞負(fù)選方案介紹
在負(fù)選時，非目標(biāo)細(xì)胞通過針對細(xì)胞表面抗原的抗體被去除。負(fù)選試劑中的抗體組合確定哪些細(xì)胞被去除。
以下情況，比較適合負(fù)選：
需要未經(jīng)標(biāo)記的細(xì)胞
若將抗體結(jié)合到目標(biāo)細(xì)胞上會造成抑制或活化，影響下游研究
目標(biāo)細(xì)胞沒有特異性抗體可用來標(biāo)記
需要去除某些類型的細(xì)胞
EasySep™人T細(xì)胞富集試劑盒
EasySep™人T細(xì)胞富集試劑盒可用于從新鮮或凍存外周血單個核細(xì)胞中通過負(fù)選方式分離T細(xì)胞。不需要的細(xì)胞被識別非T細(xì)胞的四聚體抗體復(fù)合物（Tetrameric Antibody Complexes）和dextran包被的磁珠標(biāo)記后移除。被標(biāo)記細(xì)胞不需要過柱，使用EasySep™磁極就能簡單分離。需要的細(xì)胞被倒到新管子。分離細(xì)胞可以立即用于下游：流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)（CAR-T免疫療法）或DNA/RNA提取。
推薦使用新版EasySep™人T細(xì)胞分選試劑盒（貨號：17951），短至8分鐘即可完成免疫磁珠細(xì)胞分選。
EasySep™ Human T Cell Enrichment Kit targets non-T cells for removal with antibodies recognizing specific cell surface markers. Unwanted cells are labeled with antibodies and magnetic particles, and separated without columns using an EasySep™ magnet. Desired cells are simply poured off into a new tube. Isolated cells are immediay available for downstream applications such as flow cytometry, culture, or DNA/RNA extraction.
基本信息
中文名稱 EasySep™人T細(xì)胞富集試劑盒
英文名稱 EasySep™ Human T Cell Enrichment Kit
用于標(biāo)記1 x 109個細(xì)胞
EasySep™人T細(xì)胞富集試劑盒是套裝，包含：
EasySep™ Human T Cell Enrichment Cocktail（1mL） T細(xì)胞富集抗體復(fù)合物
EasySep™ D Magnetic Particles（1mL） 磁珠
貨號：19051
保存 2 - 8°C，不能冷凍。
EasySep™ Human T Cell Enrichment Kit適用樣本
EasySep™ Human T Cell Enrichment Kit可用于從各種樣本來源中分選高純度的人T細(xì)胞，包括：新鮮或凍存外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）、白細(xì)胞單采術(shù)（Leuko Pak）樣本。目標(biāo)細(xì)胞被抗體復(fù)合物和磁珠標(biāo)記，以進(jìn)行負(fù)選。
CAR-T免疫細(xì)胞療法相關(guān)產(chǎn)品
淋巴細(xì)胞分離液
GE Ficoll Paque淋巴細(xì)胞分離液是一種無菌、即用型的淋巴細(xì)胞分離液，根據(jù)外周血中各類細(xì)胞在密度梯度離心中呈現(xiàn)不同的密度梯度分布而將全血中的淋巴細(xì)胞等單個核細(xì)胞進(jìn)行分離。適用人外周血、骨髓和臍帶血的單個核細(xì)胞分離。Ficoll Paque PREMIUM經(jīng)GMP認(rèn)證，適合臨床使用。
GE | 17-1440-02 | Ficoll Paque PLUS,1.078 g/ml淋巴細(xì)胞分離液 | 6×100 ml |
GE | 17-1440-03 | Ficoll Paque PLUS,1.078 g/ml淋巴細(xì)胞分離液 | 6×100 ml |
GE | 17-5442-02 | Ficoll Paque PREMIUM,1.078 g/ml淋巴細(xì)胞分離液 | 6×100 ml |
GE | 17-5442-03 | Ficoll Paque PREMIUM,1.078 g/ml淋巴細(xì)胞分離液 | 6×100 ml |
免疫磁珠分選
Stemcell免疫磁珠分選
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品描述 |
Stemcell | 19051 | EasySep Human T Cell Enrichment Kit EasySep™人T細(xì)胞富集試劑盒 |
Stemcell | 17951 | EasySep™Human T Cell Isolation Kit，EasySep™人T細(xì)胞富集試劑盒的新版 |
Stemcell | 17851 | EasySep™ Human CD3 Positive Selection Kit II，T細(xì)胞正選 |
Stemcell | 18000 | EasySep™磁極 |
Stemcell | 20144 | EasySep™Buffer |
Miltenyi免疫磁珠分選
臨床級CART制備方案
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品描述 |
Miltenyi | 200-070-132 | CliniMACS CD4 Reagent CE |
Miltenyi | 200-070-115 | CliniMACS D8 Reagent |
Miltenyi | 200-070-119 | CliniMACS CD62L Reagent CE |
Miltenyi | 200-070-131 | CliniMACS CD25 Reagent, CE |
Miltenyi | 200-070-146 | CliniMACS CD45RA Reagent |
Miltenyi | 200-070-117 | CliniMACS CD19 Reagent, CE |
Miltenyi | 200-070-118 | CliniMACS CD14 Reagent, CE |
Miltenyi | 200-073-104 | CliniMACS Tubing Set, CE |
Miltenyi | 130-097-184 | CliniMACS Prodigy TS 510 for Research Use |
T細(xì)胞級亞群的分選
Miltenyi | 130-091-114 | CD2 MicroBeads, human | 2 mL |
Miltenyi | 130-050-101 | CD3 MicroBeads, human | 2 mL |
Miltenyi | 130-098-193 | MACSxpress Pan T Cell Isolation Kit | 1 kit |
Miltenyi | 130-096-535 | Pan T Cell Isolation Kit, human | 1 kit |
Miltenyi | 130-091-264 | CD6 MicroBeads, human | 2 mL |
Miltenyi | 130-093-247 | CD28 MicroBead Kit, human | 1 kit |
Miltenyi | 130-097-095 | Naive Pan T Cell Isolation Kit, human | 1 kit |
Miltenyi | 130-045-101 | CD4 MicroBeads | 2 mL |
Miltenyi | 130-055-101 | CD4 Multisort Kit, human | 1 kit |
Miltenyi | 130-096-533 | CD4+T Cell Isolation Kit | 1 kit |
Miltenyi | 130-045-201 | CD8 MicroBeads | 2 mL |
Miltenyi | 130-055-201 | CD8 Multisort Kit, human | 1 kit |
Miltenyi | 130-096-495 | CD8+ T Cell Isolation Kit去除分選，untouched細(xì)胞 | 1 kit |
Miltenyi | 130-094-131 | Naive CD4+ T Cell Iso Kit II, human | 1 kit |
Miltenyi | 130-091-758 | CD62L MicroBeads, human | 2 mL |
Miltenyi | 130-045-901 | CD45RA MicroBeads, human | 2 mL |
Miltenyi | 130-046-001 | CD45RO MicroBeads, human | 2 mL |
Miltenyi | 130-094-302 | CD4+ Central Mem T Cell Isoaltion Kit,human | 1 kit |
Miltenyi | 130-093-244 | Naive CD8+ T Cell Iso Kit, human | 1 kit |
Miltenyi | 130-045-901 | CD45RA MicroBeads | 2 mL |
Miltenyi | 130-046-001 | CD45RO MicroBeads, human | 2 mL |
Miltenyi | 130-094-412 | CD8+ Memory T Cell Isolation Kit, human | 1 kit |
Miltenyi | 130-042-301 | MidiMACS™ Starting Kits，LS | 1 kit |
Miltenyi | 130-090-329 | MidiMACS™ Starting Kits，LD | 1 kit |
Miltenyi | 130-091-758 | CD62L MicroBeads | 2 mL |
Miltenyi | 130-091-221 | autoMACS® Running Buffer – MACS® Separation Buffer | 6×1.5 L |
Miltenyi | 130-091-222 | autoMACS® Rinsing solution | 6×1.45 L |
Miltenyi | 130-091-376 | autoMACS® Running Buffer – MACS® Separation Buffer | 6×75 mL |
激活：CAR-T細(xì)胞 CIK細(xì)胞
T細(xì)胞活化抗人CD3單克隆抗體（Functional，clone: OKT3）可以與TCR復(fù)合物結(jié)合，激活T細(xì)胞。SAFIRE(Sodium Azide Free Immensely Reduced Endotoxins) 類產(chǎn)品是BioGems品牌下的功能性抗體產(chǎn)品。
Dynabeads® Human T-Activator CD3/CD28 用于活化和擴(kuò)增人 T 細(xì)胞和 T 細(xì)胞克隆，以作研究之用。Dynabeads® CD3/CD28 T Cell Expander 提供了活化和擴(kuò)增 T 細(xì)胞的簡單方法，無需抗原呈遞細(xì)胞或抗原。 Dynabeads® Human T-Activator CD3/CD28 是均勻的 4.5 µm 超順磁珠，與抗 CD3 和抗 CD28 單克隆抗體的優(yōu)化混合物偶聯(lián)。通過使抗 CD3 和抗 CD28 抗體與 Dynabeads® 結(jié)合，這種微珠可以提供 T 細(xì)胞活化和擴(kuò)增所需的原始和共刺激信號。
RetroNectin®重組人纖維蛋白片段和CD3單克隆抗體（OKT3）兩者共同作用可以刺激T細(xì)胞的增殖和分化。
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品描述 | 包裝 |
PeproTech/BioGems | 05121-25-500 | Anti-Human CD3 mAb （克隆號OKT3） | 500μg |
PeproTech/BioGems | 10311-25-500 | Anti-Human CD28 mAb（克隆號CD28.2） | 500μg |
GIBCO | 11131D | Dynabeads™ Human T-Activator CD3/CD28 磁珠 | 2 mL |
StemCell | 10971 | ImmunoCult™ Human CD3/CD28 T Cell Activator | 2 mL |
StemCell | 10970 | ImmunoCult™ Human CD3/CD28/CD2 T Cell Activator | 2 mL |
PeproTech | AF-200-02 | 重組人IL-2 (Animal Free) | 50ug/ 100ug |
PeproTech | AF-300-02 | 重組人IFN-γ(Animal Free) | 100ug |
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品描述 | 包裝 |
TAKARA | T100B | RetroNectin® Recombinant Human Fibronectin Fragment 重組人纖維蛋白片段 | 2.5mg |
TAKARA | T100A | 0.5mg | |
TAKARA | T201 | RetroNectin® Recombinant Human Fibronectin Fragment 重組人纖維蛋白片段，GMP級 | 2.5 mg 凍干粉 |
擴(kuò)增：免疫細(xì)胞培養(yǎng)基
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品描述 | 包裝 |
Corning | 88-581-CM | KBM581, serum-free medium for DC and CIK DC/CIK 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 | 1 L/瓶 |
StemCell | 10981 | ImmunoCult™-XF T Cell Expansion Medium 無血清T細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基 | 500mL/瓶 |
TAKARA | GT-T551 H3 | 淋巴細(xì)胞、DC細(xì)胞、NK細(xì)無血清胞培養(yǎng)基 | 1000 ml |
檢測
細(xì)胞增殖檢測
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品描述 | 包裝 |
PeproTech/BioGems | 63310-00-500 | CFSE | 500 mg |
細(xì)胞凋亡檢測
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品描述 | 包裝 |
PeproTech/BioGems | 60910-00 | Propidim Iodide Solution | 200 tests 500 tests |
PeproTech/BioGems | 61410-00 | 7-AAD Solution | 200 tests 500 tests |
慢病毒檢測
TAKARA | 632200 | Lenti-X p24 Rapid Titer Kit慢病毒滴度測定 p24 ELISA 試劑盒 | 1 kit |
Gibco | 11913-019 | CD 293 無蛋白培養(yǎng)基 | 1000 mL |
CAR-T凍存
GMP級BioLife Solutions細(xì)胞凍存液
BioLife Solutions | 210102 | CryoStor CS10 Freeze Media 細(xì)胞DMSO凍存液
| 100 mL/瓶 |
BioLife Solutions | 202102 | CryoStor CS2 Freeze Media 細(xì)胞DMSO凍存液
| 100 mL/瓶 |
BioLife Solutions | 205102 | CryoStor CS5 Freeze Media 細(xì)胞DMSO凍存液
| 100 mL/瓶 |
細(xì)胞凍存袋
OriGen CryoStore 細(xì)胞凍存袋
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品描述 | 包裝 |
OriGen | CS25N | CryoStore 25 EVA 凍存袋，N型管路 | 24個/箱 |
OriGen | CS50 | CryoStore 50 EVA 凍存袋 | 24個/箱 |
OriGen | CS250 | CryoStore 250 EVA 凍存袋 | 24個/箱 |
OriGen | CS250N | CryoStore 250 EVA 凍存袋，N型管路 | 24個/箱 |
EasySep Human T Cell Enrichment Kit 訂購信息
細(xì)胞類型 | 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 純度 | 適用的染色抗體 |
T細(xì)胞 | 17951 17951RF | EasySep Human T Cell Isolation Kit EasySep™人T細(xì)胞分選試劑盒 | 96.7 ± 1.5% | CD2（貨號#60007） CD3（貨號#60011） CD4（貨號#60016） CD8a（貨號#60022） CD45（貨號#60018） |
19051 19051RF | EasySep Human T Cell Enrichment Kit EasySep™人T細(xì)胞富集試劑盒 | 95.0 - 99.0% |
說明：RF：貨號后加RF，比如17951RF，代表RoboSep™試劑盒：包含EasySep™分選試劑盒、RoboSep™緩沖液和1-2盒RoboSep™槍頭。
分選試劑盒和富集試劑盒的主要區(qū)別：分選試劑盒是富集試劑盒的更新版，實驗耗時更少。
EasySep Human T Cell Enrichment Kit 19051以及更多CAR-T免疫細(xì)胞治療GMP級產(chǎn)品華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司 ：1500 1904 520。紅榮微再-客服: 2395557778 經(jīng)銷商專員
紅榮微再以“傳遞科學(xué)價值，服務(wù)科學(xué)研究”為宗旨，主營干細(xì)胞、醫(yī)療、細(xì)胞治療、器官再生四大板塊的產(chǎn)品。
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