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2015版藥典中藥材中黃曲霉毒素檢測方案
黃曲霉毒素是主要由黃曲霉寄生曲霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在濕熱地區(qū)食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機(jī)率zui高。
黃曲霉毒素存在于土壤、動植物、各種堅果中，特別是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麥等糧油產(chǎn)品，是霉菌毒素中毒性zui大、對人類健康危害極為突出的一類霉菌毒素。
2013年國家藥典委員會在上公布了“關(guān)于中藥中重金屬、農(nóng)殘、黃曲霉毒素等物質(zhì)*草案的公示”——為進(jìn)一步加強(qiáng)中藥材的質(zhì)量控制，根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局的部署和安排，經(jīng)國家藥典委委員會有關(guān)單位和專家對黃曲霉毒素、重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘留量等有害物質(zhì)的控制方法、限度值以及重點(diǎn)品種進(jìn)行試驗研究，擬在2010年版《中國藥典》的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步增加中藥的安全性指標(biāo)控制項目，尤其是加強(qiáng)對中藥材中重金屬及有害元素、黃曲霉毒素、農(nóng)藥殘留量的控制。2015版中國藥典對黃曲霉毒素監(jiān)控又更加完善，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)也有了新的增加與提高.
2015版中藥材中黃曲霉毒素整體檢測方案全面結(jié)合2015版《中華人民共和國藥典》，以藥品GMP指南為依據(jù)，總編了黃曲霉毒素整體檢測方案
一、關(guān)于黃曲霉毒素*：對《中國藥典》收載的柏子仁、蓮子、使君子、檳榔、麥芽、肉豆蔻、決明子、遠(yuǎn)志、薏苡仁、大棗、地龍、蜈蚣、水蛭、全蝎等14味藥材及其飲片品種項下增加“黃曲霉毒素”檢查項目，限度為“黃曲霉毒素B1不得過5 μg/kg；黃曲霉毒素G2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素B2總量不得過10 μg/kg”。
二、方法簡介
樣品經(jīng)過甲醇-水提取，提取液經(jīng)過濾、稀釋后，經(jīng)過含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和柱凈化，此抗體對黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有專一性，黃曲霉毒素交聯(lián)在層析介質(zhì)中的抗體上。首先用水或吐溫-20/PBS將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去，然后用甲醇通過免疫親和層析柱洗脫，洗脫液通過帶熒光檢測器的液相色譜儀柱后碘溶液衍生，測定黃曲霉毒素的含量；也可采用液相色譜儀柱后光化學(xué)衍生在254 nm 下用光化學(xué)的方法對黃曲霉毒素B1和G1進(jìn)行衍生測定黃曲霉毒素的含量。
三、分析步驟
1. 提取
取供試品粉末（柏子仁、蓮子、使君子、檳榔、麥芽、肉豆蔻、決明子、遠(yuǎn)志、薏苡仁、大棗、地龍、蜈蚣、水蛭、全蝎等14味藥材及其飲片及其制品）約15 g（過二號篩），精密稱定，加入氯化鈉3 g，置于均質(zhì)瓶中，加入70%甲醇溶液75 mL，高速攪拌2分鐘（攪拌速度大于11 000轉(zhuǎn)/分），離心5分鐘（離心速度2 500轉(zhuǎn)/分），精密量取上清液15 mL，置于50 mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，待凈化。
2015版中藥材中黃曲霉毒素整體檢測方案
2. 凈化
免疫親和柱：Welchrom ?Immunoaffinity Column（3 mL）（以下部分簡寫為Welchrom ?IAC）
（1）上樣：將準(zhǔn)確移取15. 0 mL 樣品提取液注入Welchrom ?IAC，調(diào)節(jié)空氣壓力泵的壓力使溶液以約6 mL /min 流速緩慢通過免疫親和柱，直至2 mL-3 mL 空氣通過柱體，隨后調(diào)節(jié)開關(guān)，使液體以1-2 d/s 的速度流出；
（2）淋洗：以10 mL 水淋洗免疫親和柱兩次，棄去全部流出液，并使2 mL~3 mL 空氣通過Welchrom ?IAC，流速為2-3 d/s；
（3）洗脫：準(zhǔn)確加入1. 0 mL 色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min~2 mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用，流速為1 d/s。
注：（1）免疫親和柱的儲存溫度為2~8℃，使用前應(yīng)注意回溫，防止因免疫親和柱內(nèi)抗體在低溫條件下失活而導(dǎo)致凈化效果不夠理想；
（2）上樣溶液中有機(jī)相的比例不能超過25%~30%，否則會因為有機(jī)溶劑的比例過高而導(dǎo)致凈化效果不夠理想；
（3）洗脫后液體可用于HPLC檢測。（建議用水1：1稀釋后上樣）。
3. 測定
（1）液相色譜條件
色譜柱：XB-C18，5 μm， 4.6×150 mm
流動相：甲醇：乙腈：水（40：18：42）
流速：0. 8 mL/min
熒光檢測器激發(fā)波長365 nm，發(fā)射波長445 nm
經(jīng)色譜柱分離的黃曲霉毒素需經(jīng)過光化學(xué)衍生器衍生出峰順序：G2\G1\B2\B1
①碘溶液柱后衍生化法
衍生溶液：0. 05%碘溶液（稱取碘0.5 g，加入甲醇100 mL 使其溶解，用水稀釋至1000 mL）
衍生溶液流速：0. 3 mL/min
反應(yīng)管溫度：700 ℃
反應(yīng)時間：1 min
② 光化學(xué)衍生法：光化學(xué)衍生器（254 nm）。
（2）定量
精密量取黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)品（黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標(biāo)示的濃度分別為1.0 μg/mL、0.3 μg/ mL、1. μg/ mL、 0.3 μg/ mL），置于10 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為儲備液。精密量取儲備液1 mL，置于25 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。
分別精密吸取上述混合對照品溶液5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。另吸取上述試品溶液20~25 μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品中相當(dāng)于黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的量，計算，即得。
取樣品洗脫液1. 0 mL 加入重蒸餾水定容至2. 0 mL，用進(jìn)樣器吸取100 μL 注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測定試樣的響應(yīng)值（峰高或峰面積）。經(jīng)過與黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖比較響應(yīng)值得到試樣中黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2的濃度。
黃曲霉毒素檢測耗材：
濾紙；
漏斗；
錐形瓶：100ml；
玻璃纖維過濾器；
10 ml —次性注射器；
吐溫20;
磷酸氫二鈉；
磷酸二氫鉀；
氯化鉀；
氯化鈉；
甲醇，分析純；
甲醇，色譜純；
乙腈，色譜純；
正己烷，分析純；