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一、 序言

1.1己烯雌酚是一種人工合成雌激素，主要用于提高奶牛產奶量。近年來，一些商家為促進奶牛生長發(fā)育和產奶量而過度使用該激素，導致乳制品中雌激素的殘留量日益嚴重，而這中激素極有可能增加人類患乳腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌及前列腺癌等的風險。牛奶制品是人類攝入己烯雌酚的主要途徑，因此，為保障飲用牛奶的健康安全，對其進行相應檢測*。

1.2己烯雌酚（Diethylstilbestrol） CAS:50-23-7

二、應用范圍

牛奶、奶粉中己烯雌酚的檢測。

三、實驗條件：

儀器設備：

液相色譜儀，紫外檢測器，SPE固相萃取裝置，渦旋振蕩儀，氮氣吹干儀，真空泵，離心機。

試劑耗材：

濃縮牛奶，己烯雌酚標品，乙腈（色譜純），甲酸、甲醇、氨水、NaOH（均為分析純）。

色譜柱：C18（5 μm，120 Å，4.6×250 mm，）

SPE柱：RNSC603-MAX SPE柱（500 mg/6 mL 訂貨號：QCRNSC603）

四、樣品制備

4.1樣品提取

準確量取5 mL牛奶于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋振蕩3 min， 3500 r/min離心10 min，取上清液，向殘渣中再加5 mL乙腈，同前操作，合并提取液，50℃氮吹至近干，加10 mL蒸餾水，用1 mol/L NaOH調pH至11.0，9000 r/min離心5 min，上清液待凈化。

4.2 SPE柱凈化

（1）活化：依次用5 mL甲醇，5 mL水活化固相萃取柱。

（2）上樣：將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速過柱，收集流出液。

（3）淋洗：依次用1 mL氨水-水（1:19，v/v），0.5 mL甲醇以3 mL/min的流速淋洗，棄去淋洗液。

（4）洗脫：用4 mL甲酸-甲醇（1:19，v/v）以1 mL/min的流速洗脫，收集洗脫液。

（5）重新溶解：洗脫液于40℃氮吹吹干，加1 mL流動相，渦旋30 S溶解，用0.45μm濾膜過濾，供HPLC測定。

五、分析檢測

液相色譜條件

色 譜 柱：C18（250 * 4.6 mm，5 μm）

檢 測 器：UV2996型紫外/可見光檢測器

檢測波長：UV 245 nm                

流 動 相：0.1%甲酸水/甲醇=30/70         

流    速：1.0 mL/min

柱    溫：25 ℃                 

進 樣 量：20 μL

六、結論

上述方法進行固相萃取和液相色譜檢測牛奶中的己烯雌酚，添加回收率達97.41%，表明使用RNSC603-MAX SPE固相萃取柱及C18柱，可快速可靠地檢測乳制品中己烯雌酚。