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建立樣品準(zhǔn)備區(qū)
這個(gè)區(qū)域?qū)iT用作樣品的準(zhǔn)備,在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應(yīng)該采取預(yù)防措施 ⑴PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。
⑵組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理,以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。
⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。 ⑷DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作,以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。
⑸大體積樣品應(yīng)該用單獨(dú)包裝的無(wú)菌一次性移液管吸取。
⑹管子打開前都要簡(jiǎn)短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生,而且管子不能用力崩開,這樣會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。
⑺任何時(shí)候都應(yīng)該穿實(shí)驗(yàn)服和帶手套,手套要經(jīng)常更換,尤其在抽提過(guò)程中每一步之間都要更換。實(shí)驗(yàn)服要專門用于樣品準(zhǔn)備間,經(jīng)常清洗。
樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作,這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì)。青海PCR實(shí)驗(yàn)室裝修工程為了避免這一問(wèn)題,反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道。
建立前PCR區(qū)。
該去專門用于準(zhǔn)備各種反應(yīng),這個(gè)區(qū)域必須保持干凈,而且沒(méi)有來(lái)自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備,特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。
控制污染的方法。
青海PCR實(shí)驗(yàn)室裝修工程已設(shè)計(jì)出很有力的酶學(xué)方法用來(lái)消除一種形式的污染—使用UNG,這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線,這種方法不能*消除污染問(wèn)題,但可以將污染降低幾個(gè)數(shù)量級(jí)。
后PCR區(qū)PCR完成以后,需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù),應(yīng)該留出一個(gè)專門用于反應(yīng)后處理樣品的地方。后PCR活動(dòng)中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門用于這一目的,決不能把實(shí)驗(yàn)室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動(dòng) 用zui健康的材質(zhì)、zui用心的設(shè)計(jì)、zui*的工藝,為您打造一個(gè)“凈”的空間
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