HPLC色譜概述 液相色譜法(HPLC)是上個(gè)世紀(jì)七十年代迅速發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)快速的分析分離技術(shù)，是現(xiàn)代分離測(cè)試的重要手段。
色譜法的分離原理是：溶于流動(dòng)相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相(station phase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
HPLC是在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，其以液體作為流動(dòng)相，并采用顆粒極細(xì)的固定相的柱色譜分離技術(shù)。其分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同，但填料更加精細(xì)，需高壓泵推動(dòng)，柱效高，分析速度快。
與氣相色譜不同的是液相色譜中流動(dòng)相亦參與組分的分離過(guò)程，其組成、比例和pH值可靈活調(diào)節(jié)，分離模式多樣。在實(shí)際操作中主要通過(guò)改變流動(dòng)相的組成來(lái)調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性，從而使不同樣品得到分離。
液相色譜法的應(yīng)用范圍十分廣泛，對(duì)樣品的適用性廣，不受分析對(duì)象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，幾乎所有的化合物包括高沸點(diǎn)、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用液相色譜法分析測(cè)定，因而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機(jī)化合物中，可用氣相色譜分析的約占20%，而80%則需用液相色譜來(lái)分析。
液相色譜基線漂移的原因
?。?）柱的溫度波動(dòng)。即使是微小的溫度變化也會(huì)導(dǎo)致基線波動(dòng)。通常影響差異檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、UV檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器的較低靈敏度。
?。?）色譜流動(dòng)相不均勻流動(dòng)相條件變化，引起的基線漂移大于溫度變化引起的基線漂移。
?。?）污染或氣體循環(huán)池。
?。?）探測(cè)器出口堵塞。（高壓導(dǎo)致循環(huán)水池窗口的爆裂，產(chǎn)生噪聲基線）。
（5）不正確的流量比或流量變化。
?。?）柱的平衡是緩慢的，特別是當(dāng)移動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)。
（7）由低質(zhì)量的溶劑污染、變質(zhì)或制備。
?。?）個(gè)樣品具有較強(qiáng)的保留力（高K‘值）至汕頭峰。
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