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局灶性腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ?/h2>

大腦中動(dòng)脈(Middle cerebral artery, MCA)是人類腦卒中的多發(fā)部位，大腦中動(dòng)脈閉塞(Middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型被普遍認(rèn)為是局灶性腦缺血的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物模型，主要方法有線栓法、電凝法、光化學(xué)法和血栓栓塞法。

1 線栓法(thread occlusion of the middle cerebral artery)

(1)復(fù)制方法  雄性SD大鼠，體重為250～300g。經(jīng)腹腔注射水合氯醛(350～400mg/kg體重的劑量)或戊丨巴丨比丨妥丨鈉(50～60mg/kg體重的劑量)麻醉，仰臥位固定，剃除頸部毛發(fā)，手術(shù)區(qū)域皮膚常規(guī)消毒。切開右側(cè)頸部皮膚，鈍性分離胸鎖乳突肌和胸骨舌骨肌，顯露右側(cè)OCA及迷走神經(jīng)。結(jié)扎 CCA、頸外動(dòng)脈(exterial cerebral artery, ECA)及其分支動(dòng)脈。分離右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈(interial cerebral artery, ICA)，至鼓泡處可見其顱外分支翼腭動(dòng)脈，于根部結(jié)扎該分支。在ICA近端備線、遠(yuǎn)端放置動(dòng)脈夾，在ECA結(jié)扎點(diǎn)(距頸內(nèi)、頸外動(dòng)脈分叉5mm處)剪一小口，將一直徑為0.22～0.249mm(4-0號)的尼龍線經(jīng)ECA上剪口插入。插入前加熱處理使插入端變鈍(也可在尼龍線頭端用L-多聚賴氨酸涂抹后置肝素中浸泡，使成功率增高，梗塞面積恒定)，并做好進(jìn)入線長度標(biāo)記。扎緊備線，松開動(dòng)脈夾，將尼龍線經(jīng)ECA、ICA分叉處送入ICA，向前進(jìn)入17～19mm時(shí)會(huì)有阻擋感，說明栓線已穿過MCA，到達(dá)大腦前動(dòng)脈的起始部，堵塞MCA開口，造成腦組織局部缺血。1～3h后可緩慢退出尼龍線實(shí)施再灌注。

(2)模型特點(diǎn)  線栓法的優(yōu)點(diǎn)為：無須開顱，動(dòng)物損傷小，MCA閉塞效果較為理想，目前該模型被認(rèn)為是惟一能觀察到再灌流的局灶性腦缺血模型，近年來較為常用。注意點(diǎn)：線選擇極為重要，較細(xì)時(shí)不容易穿到MCA，且缺血不明顯；較粗時(shí)缺血重，容易造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的死亡。線要有的剛性，才能穿進(jìn)ICA并穿進(jìn)顱內(nèi)，鋼性過強(qiáng)則容易穿透動(dòng)脈引起顱內(nèi)出血。穿線位置也應(yīng)當(dāng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件摸索。為提高線拴法大鼠局灶性腦缺血模型的成功率和穩(wěn)定性，有學(xué)者研究了大鼠體重、拴線插入長度和直徑與MCAO模型成功的關(guān)系，用正交試驗(yàn)法得出造模型的方案是采用大鼠體重為250～300g，線長為17m/n或18mm，線直徑為0.28mm制作MCAO模型。成功率高、重復(fù)性較好。

2 電凝法(electric coagulate)

(1)復(fù)制方法  SD大鼠，雌雄不拘，體重為250～300g。經(jīng)腹腔注射水合氯醛(350～400mg/kg體重的劑量)或戊丨巴丨比丨妥丨鈉(50～60mg/kg體重的劑量)麻醉后右側(cè)臥位，剃除頸部毛發(fā)，手術(shù)區(qū)域皮膚常規(guī)消毒。在左側(cè)眼外眥到左外耳道連線的中點(diǎn)，垂直于連線切開皮膚約2cm。沿顴弓下緣依次切斷咬肌和顳肌，將這些肌肉推向前上，操作時(shí)避免損傷面神經(jīng)及動(dòng)脈。用牙科鉆在顴骨和磷狀骨前聯(lián)合前內(nèi)2mm處鉆孔開顱。在手術(shù)顯微鏡下切開硬腦膜，暴露并游離MCA。用雙電極(電壓12V)電灼損毀大腦動(dòng)脈環(huán)起始至嗅溝段的MCA。為防止電極的電流對腦組織造成電損傷，在操作過程中不斷向MCA周圍滴加生理鹽水并盡量減少電極在MCA上的作用時(shí)間。

(2)模型特點(diǎn)  開顱法的優(yōu)點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)條件較穩(wěn)定，缺血效果可靠，是經(jīng)典性缺血模型，在程度上模擬了人類一側(cè)大腦半球缺血性梗死的情況。缺點(diǎn)是開顱法干擾了腦脊液動(dòng)力學(xué)，易感染、創(chuàng)傷大，且閉塞后無法進(jìn)行再灌注損傷。電凝并切斷MCA起始部至大腦下靜脈之間或嗅束內(nèi)側(cè)2mm至大腦下靜脈之間的一段MCA后，可阻斷豆紋動(dòng)脈及近端小皮質(zhì)支的側(cè)支血流，在基底核區(qū)和皮質(zhì)形成較恒定的梗死灶，梗死發(fā)生率可達(dá)100％。因此大鼠出現(xiàn)嚴(yán)重的神經(jīng)功能缺失體征，且與梗死范圍有顯著相關(guān)性，從而為研究不可逆性腦缺血提供了可靠的動(dòng)物模型。

3 光化學(xué)法(photochemistry)

光化學(xué)刺激可造成嚴(yán)重的血管內(nèi)皮損傷，在短時(shí)間內(nèi)光照區(qū)內(nèi)的血管即可發(fā)生性血栓形成，進(jìn)而形成局灶性的梗死灶。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可選用兔、大鼠或豚鼠等造模。

(1)復(fù)制方法  動(dòng)物麻醉后固定于腦立體定位儀上，剪除手術(shù)區(qū)域毛發(fā)，皮膚常規(guī)消毒。在左側(cè)眼外眥到左外耳道連線的中點(diǎn)，垂直于連線切開皮膚約2cm，去處顳肌，顯微手術(shù)鏡下用鉆頭打開一直徑6mm的骨窗，保留硬膜。將直徑3mm的光導(dǎo)纖維遠(yuǎn)端置于顱底MCA經(jīng)過嗅束的起始處，靜脈注射化學(xué)熒光染料四碘四氯熒光素二鈉，同時(shí)打開光源引導(dǎo)波長520～620mm的冷光照射。光線透過顱骨與血管內(nèi)的染料接觸，激發(fā)光化學(xué)反應(yīng)，引起照射部位皮質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞毒性腦水腫，從而導(dǎo)致腦梗死。同時(shí)用多普勒激光探頭監(jiān)測腦組織血流量。

(2)模型特點(diǎn)  這一模型的優(yōu)點(diǎn)為：①較好地模擬了人類腦血栓形成的動(dòng)態(tài)過程，符合目前臨床治療理論的新發(fā)展，為臨床治療提供了有效的實(shí)驗(yàn)工具。②在硬腦膜外操作，不影響顱內(nèi)壓和顱內(nèi)環(huán)境。③給藥方式靈活且針對性強(qiáng)，既可預(yù)防性給藥，觀察藥物提高血管抗損傷的效能，又可治療性給藥，評價(jià)抗血栓藥、溶栓藥和血管保護(hù)劑的藥理作用和療效。

Suzuki等用豚鼠光化學(xué)腦梗死模型觀察到，這一模型在實(shí)施過程中存在反復(fù)缺血再灌注現(xiàn)象，表明這一模型在研究血栓形成缺血再灌注方面有獨(dú)丨一丨無丨二的優(yōu)勢。不足之處為光敏物質(zhì)對血液系統(tǒng)有影響，微血管明顯損傷、血一腦屏障早期開放、血管源性腦水腫均為大血管閉塞的非典型表現(xiàn)，而非人類腦血栓形成的表現(xiàn)特征。

4 血栓法(autologous blood emboli)

(1)復(fù)制方法

1)血栓的制作  SD大鼠，經(jīng)腹腔注射水合氯醛(350～400mg/kg體重的劑量)或戊丨巴丨比丨妥丨鈉(50～60mg/kg體重的劑量)麻醉后使大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，剪除手術(shù)區(qū)域毛發(fā)，皮膚常規(guī)消毒。切開左下肢皮膚。找到股靜脈，穿刺抽靜脈血0.5ml加入0.15ml凝血酶(200U加0.4ml生理鹽水)后立即混勻，隨后注入2根連續(xù)硬膜外麻醉導(dǎo)管內(nèi)，靜置15～20min?？p合完皮膚后，將導(dǎo)管內(nèi)的血凝塊用注射器緩緩移入生理鹽水中，清洗2～3遍以去掉血栓表面的紅細(xì)胞。在顯微鏡下觀察，選擇富含纖維素的血栓剪成14～18個(gè)2mm長的小段，然后將這些被選擇的片段置于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液(或生理鹽水)中。在磷酸鹽緩沖液中靜置4～5h，使其完成凝縮后，將血栓連同磷酸鹽緩沖液一起吸入一根透明的連續(xù)硬膜外麻醉導(dǎo)管備用，注意避免導(dǎo)管內(nèi)吸入空氣。(也可在導(dǎo)管兩端各接一裝有生理鹽水的注射器，使鹽水反復(fù)通過導(dǎo)管沖洗血栓5min)。

2)鼠腦栓塞模型制作  待血栓凝縮4h后，將大鼠再次麻醉，手術(shù)區(qū)域皮膚消毒。頸正中偏左切開皮膚，鈍性分離出左側(cè)CCA，ICA和ECA。結(jié)扎ECA的2個(gè)分支，穿2根線于ECA，將ECA遠(yuǎn)心端結(jié)扎。結(jié)扎ICA分支翼突腭動(dòng)脈。動(dòng)脈夾夾閉CCA和ICA，在ECA遠(yuǎn)端剪一“V”形切口，將22號套管針由ECA遠(yuǎn)端向近端插管。插管成功后拔出針芯，將插入的套管置入CCA分叉處，用線固定套管，將含血栓的透明導(dǎo)管用20號套管針芯連接于22號套管，松開頸內(nèi)動(dòng)脈夾，緩緩將導(dǎo)管內(nèi)的血栓和磷酸鹽緩沖液注入ICA(30s)后拔出套管。結(jié)扎ECA近心端，松開頸總動(dòng)脈夾，縫合皮膚。整個(gè)操作過程注意保持大鼠體溫，肛溫保持在36～37℃。

(2)模型特點(diǎn)  該模型產(chǎn)生了顯著而持久的供血中斷，并形成了范圍恒定和邊界清楚的梗死灶。在確定血栓注射入ICA后，造模成功率達(dá)80％以上。這種模型類似人類的自然梗死現(xiàn)象，手術(shù)創(chuàng)傷小，成功率高。血栓富含纖維蛋白，既適用于介入治療和溶栓降纖治療的研究，也適用于局灶性腦缺血藥物保護(hù)機(jī)制的研究，以及血小板微血栓形成后的腦病理改變研究。該模型相對于線栓法和光化學(xué)法更貼近于臨床上的腦栓塞。缺點(diǎn)是不易預(yù)見缺血部位和范圍，不能再通，栓塞動(dòng)脈對側(cè)也可能受累，并可能導(dǎo)致外源性物質(zhì)引起的炎癥反應(yīng)等。

5 局灶性腦缺血再灌注(reperfusion after local cerebral ischemia)

局灶性腦缺血再灌注選用多的模型是線栓法。按照上述方法阻斷CCA，ECA和ICA，用栓線(尼龍線)阻斷 MCA，造成腦組織局部缺血。1～3h后可緩慢退出尼龍線實(shí)施再灌注。

由于豚鼠光化學(xué)腦梗死模型的實(shí)施過程中存在反復(fù)缺血再灌注現(xiàn)象，因此這一模型可用于血栓形成缺血再灌注的研究。