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雙11？侃侃這11種常用色譜分析方法
閱讀：3962發(fā)布時(shí)間：2021-11-8
色譜法根據(jù)其分離原理可分為：吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜法與排阻色譜法等。又可根據(jù)分離方法分為：紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。
紙色譜法：紙色譜法系以紙為載體，以紙上所含水分或其他物質(zhì)為固定相，用展開劑進(jìn)行展開的分配色譜法。供試品經(jīng)展開后，可用比移值（Rf）表示其各組成成分的位置（比移值=原點(diǎn)中心至斑點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)中心至展開劑前沿的距離）。用作藥品鑒別時(shí)，供試品在色譜圖中所顯主斑點(diǎn)的位置與顏色（或熒光），應(yīng)與對照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在色譜圖中所顯主斑點(diǎn)相同；用作藥品純度檢查時(shí)，取一定量的供試品，經(jīng)展開后，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，檢視其所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)的個數(shù)和呈色深度（或熒光強(qiáng)度）；進(jìn)行藥品含量測定時(shí)，將待測色譜斑點(diǎn)剪下經(jīng)洗脫后，再用適宜的方法測定。該方法需要點(diǎn)樣器、展開容器、色譜濾紙等。
薄層色譜法：
薄層色譜法系將供試品溶液點(diǎn)于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與適宜的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按同法所得的色譜圖對比，亦可用薄層色譜掃描儀進(jìn)行掃描，用于鑒別、檢査或含量測定。該方法需要薄層板、點(diǎn)樣器、展開容器、顯色裝置、檢視裝置或波層色譜掃描儀。
柱色譜法：
色譜柱為內(nèi)徑均勻、下端(帶或不帶活塞)縮口的硬質(zhì)玻璃管，端口或活塞上部鋪墊適量棉花或玻璃纖維，管內(nèi)裝人吸附劑。吸附劑的顆粒應(yīng)盡可能大小均勻，以保證良好的分離效果。除另有規(guī)定外，通常采用直徑為0.07?0.15mm的顆粒。色譜柱的大小，吸附劑的品種和用量，以及洗脫時(shí)的流速，均按各品種項(xiàng)下的規(guī)定。根據(jù)原理可分為吸附柱色譜、分配柱色譜。
高效液相色譜法：高效液相色譜法系采用髙壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵裝有填充劑的色譜柱，對供試品進(jìn)行分離測定的色譜方法。注入的供試品，由流動相帶人色譜柱內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并進(jìn)人檢測器檢測，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號。髙效液相色譜儀由髙壓輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。色譜柱內(nèi)徑一般為3.9?4.6mm，填充劑粒徑為3?l0um。超高效液相色譜儀是適應(yīng)小粒徑（約2um)填充劑的耐超髙壓、小進(jìn)樣量、低死體積、高靈敏度檢測的高效液相色譜儀。檢測器常用的有紫外-可見分光檢測器、二極管陣列檢測器、熒光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、示差折光檢測器、電化學(xué)檢測器和質(zhì)譜檢測器等。
離子色譜法：離子色譜法系采用高壓輸液泵系統(tǒng)將規(guī)定的洗脫液帶入裝有填充劑的色譜柱對可解離物質(zhì)進(jìn)行分離測定的色譜方法。注入的供試品，由洗脫液帶入色譜柱內(nèi)進(jìn)行分離后，進(jìn)入檢測器（必要時(shí)經(jīng)過抑制器或衍生系統(tǒng)），由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄并處理色譜信號。離子色譜法常用于無機(jī)陰離子、無機(jī)陽離子、有機(jī)酸、糖醇類、氨基糖類、氨基酸、蛋白質(zhì)、糖蛋白等物質(zhì)的定性和定量分析。它的分離機(jī)理主要為離子交換，即基于離子交換色譜固定相上的離子與流動相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子之間進(jìn)行的可逆交換；離子色譜法的其他分離機(jī)理還有形成離子對、離子排阻等。離子色譜儀器中所有與洗脫液或供試品接觸的管道、器件均應(yīng)使用惰性材料，如聚醚醚酮（PEEK）等。電導(dǎo)檢測器是離子色譜常用的檢測器，其他檢測器有安培檢測器、紫外檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器等。
分子排阻色譜法：分子排阻色譜法是根據(jù)待測組分的分子大小進(jìn)行分離的一種液相色譜技術(shù)。分子排阻色譜法的分離原理為凝膠色譜柱的分子篩機(jī)制。色譜柱多以親水硅膠、凝膠或經(jīng)過修飾的凝膠如葡聚糖凝膠（Sephadex）和瓊脂糖凝膠（Sepharose）等為填充劑，這些填充劑表面分布著不同孔徑尺寸的孔，藥物分子進(jìn)人色譜柱后，它們中的不同組分按其分子大小進(jìn)人相應(yīng)的孔內(nèi)，大于所有孔徑的分子不能進(jìn)人填充劑顆粒內(nèi)部，在色譜過程中不被保留，早被流動相洗脫至柱外，表現(xiàn)為保留時(shí)間較短；小于所有孔徑的分子能自由進(jìn)人填充劑表面的所有孔徑，在色譜柱中滯留時(shí)間較長，表現(xiàn)為保留時(shí)間較長；其余分子則按分子大小依次被洗脫。
圖片
氣相色譜法：
氣相色譜法系采用氣體為流動相（載氣）流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測定的色譜方法。物質(zhì)或其衍生物氣化后，被載氣帶人色譜柱進(jìn)行分離，各組分先后進(jìn)人檢測器，用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號。所用的儀器為氣相色譜儀，由載氣源、進(jìn)樣部分、色譜柱、柱溫箱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。適合氣相色譜法的檢測器有火焰離子化檢測器（FID）、熱導(dǎo)檢測器（TCD）、氮磷檢測器（NPD）、火焰光度檢測器（FPD）、電子捕獲檢測器（ECD）、質(zhì)譜檢測器（MS）等。
超臨界流體色譜法：超臨界流體色譜法（supercriticalfluidchromatography,SFC）是以超臨界流體作為流動相的一種色譜方法。所謂超臨界流體，是指既不是氣體也不是液體的—些物質(zhì)，它們的物理性質(zhì)介于氣體和液體之間，臨界溫度通常髙于物質(zhì)的沸點(diǎn)和三相點(diǎn)。超臨界流體具有對于色譜分離極其有利的物理性質(zhì)。它們的這些性質(zhì)恰好介于氣體和液體之間，使超臨界流體色譜兼具氣相色譜和液相色譜的特點(diǎn)。臨界流體色譜中的色譜柱可以是填充柱也可以是毛細(xì)管柱，分別為填充柱超臨界流體色譜法(pSFC)和毛細(xì)管超臨界流體色譜法（cSFC）。
臨界點(diǎn)色譜法：臨界點(diǎn)色譜法（liquidchromatographyatcriticalcondition,LCCC）是根據(jù)聚合物的功能基、嵌段結(jié)構(gòu)的差異進(jìn)行聚合物分離的一種色譜技術(shù)。臨界點(diǎn)色譜法的原理是基于臨界點(diǎn)之上、臨界點(diǎn)之下以及臨界點(diǎn)附近的標(biāo)度理論。當(dāng)使用多孔填充材料作為固定相時(shí)，分子排阻色譜（sizeexclusionchromatography，SEC）和相互作用色譜（interactionchromatography，IC）的分離機(jī)制在分離聚合物時(shí)同時(shí)發(fā)生作用。在某個特殊色譜條件（固定相、流動相的組成、溫度）下，存在兩種分離機(jī)制的臨界點(diǎn)，被稱為焓熵互補(bǔ)點(diǎn)或色譜臨界條件（criticalconditions）或臨界吸附點(diǎn)（criticaladsorptionpoint,CAP）。在這一點(diǎn)，聚合物分子按照分子末端功能基團(tuán)的不同或嵌段結(jié)構(gòu)的差異分離，與聚合物的摩爾質(zhì)量（分子量）無關(guān)，聚合物的洗脫體積等于色譜柱的空隙體積。此時(shí)聚合物的長鏈成為了“色譜不可見”（chromatographicallyinvisible）。
電泳法：電泳是指溶解或懸浮于電解液中的帶電荷的蛋白質(zhì)、膠體、大分子或其他粒子，在電流作用下向其自身所帶電荷相反的電極方向遷移。電泳法是指利用溶液中帶有不同量電荷的陽離子或陰離子，在外加電場中使供試品組分以不同的遷移速度向?qū)?yīng)的電極移動，實(shí)現(xiàn)分離并通過適宜的檢測方法記錄或計(jì)算，達(dá)到測定目的的分析方法。電泳法一般可分為兩大類：一類為自由溶液電泳或移動界面電泳，另一類為區(qū)帶電泳。
移動界面電泳是指不含支持物的電泳，溶質(zhì)在自由溶液中泳動，故也稱自由溶液電泳。區(qū)帶電泳指含有支持介質(zhì)的電泳，帶電荷的供試品（如蛋白質(zhì)、核苷酸等大分子或其他粒子)在惰性支持介質(zhì)(如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等）中，在電場的作用下，向其極性相反的電極方向按各自的速度進(jìn)行泳動，使組分分離成狹窄的區(qū)帶。
毛細(xì)管電泳法：毛細(xì)管電泳法是指以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場為驅(qū)動力，根據(jù)供試品中各組分淌度（單位電場強(qiáng)度下的遷移速度）和（或）分配行為的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一種分析方法。其分離模式有：毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）、毛細(xì)管等速電泳（CITP）、毛細(xì)管等速電泳（CITP）、膠束電動毛細(xì)管色譜（MEKC）、親和毛細(xì)管電泳（ACE）、毛細(xì)管凝膠電泳（CGE）、毛細(xì)管電色譜（CEC）、毛細(xì)管陣列電泳（CAE）、芯片式毛細(xì)管電泳（ChipCE）。
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