Iba1（Ionized calcium-binding adapter molecule1）是分子量約為17 kDa的鈣結(jié)合蛋白。由于在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，Iba1在小膠質(zhì)細(xì)胞中特異性表達(dá)，因此被用作小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物。據(jù)報(bào)告稱，Iba1在靜息型小膠質(zhì)細(xì)胞和活化型小膠質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá)，但有報(bào)告稱在活化型小膠質(zhì)細(xì)胞中其表達(dá)會(huì)有所增加。

Iba1抗體，兔源（免疫組化用）

Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry)

Iba1（Ionized calcium-binding adapter molecule 1）是分子量約為17 kDa的鈣結(jié)合蛋白。由于在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，Iba1在小膠質(zhì)細(xì)胞中特異性表達(dá)^1），因此被用作小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物。據(jù)報(bào)告稱，Iba1在靜息型小膠質(zhì)細(xì)胞和活化型小膠質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá)，但有報(bào)告稱在活化型小膠質(zhì)細(xì)胞中其表達(dá)會(huì)有所增加^2）。另外，Iba1也會(huì)在外周組織的巨噬細(xì)胞中表達(dá)，被稱為AIF-1（同種異體移植物炎癥因子1，Allograft inflammatory factor-1）。Iba1在細(xì)胞內(nèi)與F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合，發(fā)揮著形成肌動(dòng)蛋白纖維束的作用。這種肌動(dòng)蛋白纖維束的形成被認(rèn)為是細(xì)胞遷移和吞噬過程中觀察細(xì)胞膜波動(dòng)結(jié)構(gòu)形成所必須的^3）。

抗Iba1，兔源（免疫組化用）在免疫組織染色中可以對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞包括突起一并進(jìn)行染色，因此被世界各地的研究人員作為小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記抗體的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)使用。

近年來(lái)，小膠質(zhì)細(xì)胞因其神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)作用以及通過產(chǎn)生NO、TNF-α和IL-1β引起的神經(jīng)損傷作用備受關(guān)注。

小膠質(zhì)細(xì)胞的染色圖像

Anti Iba1，兔源（免疫組化用）

◆特點(diǎn)

● 在免疫組織染色（冰凍切片）中可染色小膠質(zhì)細(xì)胞包括其突起^※

● 使用濃度為1︰500 - 1︰1,000，少量使用也可染色。

※ 染色程度取決于樣品狀況，無(wú)法保證一定能染色成功。

◆抗體信息

※ 擁有犬^4）、貓^5）、豬^6）、狨猴^7）、斑馬魚^8）的應(yīng)用實(shí)例

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◆應(yīng)用數(shù)據(jù)

免疫組織染色（小鼠）

免疫組織染色（大鼠）

◆Anti Iba1抗體系列

◆Anti Iba1產(chǎn)品列表

相關(guān)資料

◆原代小膠質(zhì)細(xì)胞ICC實(shí)驗(yàn)方案示例

將從新生大鼠（出生0~2天）的大腦中制備和培養(yǎng)的原代混合膠質(zhì)細(xì)胞按照1.0×105 cell/well接種至4 well-plate、13 φmm蓋玻片（PLL涂層）。

↓

固定：4% formaldehyde-PBS, 15 min

↓

清洗：PBS

↓

通透：0.1% TX-100 PBS, 5 min

↓

封閉：3% BSA-3% normal goat serum-PBS (blocking buffer), >15min

↓

一抗反應(yīng)：抗Iba1抗體（1:1,000）blocking buffer, 1h

↓

清洗

↓

二抗反應(yīng)：Alexa Fluor 488標(biāo)記抗兔IgG抗體/blocking buffer, 1h

↓

封片

↓

在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察

FAQ

◆關(guān)于抗體

Q1：抗原是什么樣的？

A1：是Iba1的合成肽（C端序列相同）。具體序列未公開。

Q2：50 μg的使用量是多少？

A2：在免疫組織染色中，每張玻片使用200 μL抗體溶液（稀釋度為 1:1,000）的情況下，可使用約500次。

◆關(guān)于實(shí)驗(yàn)方案

Q3：建議使用哪種二抗？

A3：FUJIFILM Wako擁有以下二抗的使用實(shí)例，可供參考。

Alexa Fluor^® 488-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) （Jackson ImmunoResearch公司, 廠家編號(hào): 111-545-144）

Alexa Fluor^® 647-conjugated AffiniPure Donkey anti-Rabbit IgG (H+L)　(Jackson ImmunoResearch公司, 廠家編號(hào): 711-605-152)

◆關(guān)于故障排除

Q4：WB中無(wú)法檢測(cè)出條帶

A4：本抗體適用于免疫組織染色（冰凍切片）以及免疫細(xì)胞染色，如需進(jìn)行WB，請(qǐng)使用 抗Iba1,兔源（Western Blotting用) （產(chǎn)品編號(hào)：016-20001）

Q5：免疫組織染色和免疫細(xì)胞染色中小膠質(zhì)細(xì)胞無(wú)法染色

A5：可能導(dǎo)致此問題的原因有以下幾種，請(qǐng)嘗試對(duì)應(yīng)的解決方案。

1. 固定不充分

有報(bào)告稱，未灌注固定或固定不充分的樣品染色效果會(huì)降低。請(qǐng)?jiān)诿庖呓M織染色中使用4%多-聚甲醛（PFA）進(jìn)行灌注固定后再制備冰凍切片。

2. 抗原變性

請(qǐng)嘗試在以下條件下進(jìn)行抗原修復(fù)操作

（A）檸檬酸緩沖液（pH 6.0）, 90℃, 9 min

（B）TE緩沖液（pH 9.0）, 90℃, 9 min

3. 樣品變質(zhì)

需要重新制備樣品，切片厚度約為20-50 μm。

4. 抗體量少

請(qǐng)?zhí)岣呖贵w濃度，推薦濃度為1︰500~1,000。

Q6：免疫組織染色和免疫細(xì)胞染色的背景過高。

A6：導(dǎo)致此問題的可能原因有以下幾種，請(qǐng)嘗試對(duì)應(yīng)的解決方案。

① 封閉不充分

請(qǐng)嘗試延長(zhǎng)封閉的孵育時(shí)間或更換封閉試劑。建議使用推薦Protocol中記載的1% BSA, 含0.3% TritonX-100的PBS和含1% BSA, 0.3% Tween-20的PBS，或3%二抗宿主的正常血清。

② 一抗的量過多

請(qǐng)降低一抗?jié)舛?，推薦濃度為1︰500~1,000。

③ 二抗的反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)

請(qǐng)縮短反應(yīng)時(shí)間。推薦反應(yīng)時(shí)間為1~2 h，或增加二抗反應(yīng)后的清洗次數(shù)。

④ 樣品變質(zhì)

需要重新制備樣品，切片厚度約為20-50 μm。

⑤ 抗原變性

請(qǐng)嘗試在以下條件下進(jìn)行抗原修復(fù)操作

（A）檸檬酸緩沖液（pH 6.0）, 90℃, 9 min

（B）TE緩沖液（pH 9.0）, 90℃, 9 min

⑥ 內(nèi)源性的過氧化物酶發(fā)生反應(yīng)（使用HRP或POD作為檢測(cè)酶時(shí)）

為了滅活內(nèi)源性過氧化物酶，請(qǐng)?jiān)谧钄嗲笆褂煤?%過氧化氫的80%甲醇溶液，并在-20℃條件下處理20 min。

Q7：在免疫組織染色中，除小膠質(zhì)細(xì)胞外，神經(jīng)細(xì)胞也被染色。

A7：可能導(dǎo)致此問題的原因有以下幾種，請(qǐng)嘗試對(duì)應(yīng)的解決方案。

① 抗體的量過多

請(qǐng)降低一抗或二抗的抗體濃度，抗Iba1抗體的推薦濃度為1︰500~1,000。

② 二抗的反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)

請(qǐng)縮短反應(yīng)時(shí)間。推薦反應(yīng)時(shí)間為1~2 h，或增加二抗反應(yīng)后的清洗次數(shù)。

③ 抗原變性

請(qǐng)嘗試在以下條件下進(jìn)行抗原修復(fù)操作

（A）檸檬酸緩沖液（pH 6.0）, 90℃, 9 min

（B）TE緩沖液（pH 9.0）, 90℃, 9 min

◆關(guān)于應(yīng)用數(shù)據(jù)

Q8：本抗體可以用于流式細(xì)胞儀嗎？

A8：FUJIFILM Wako沒有使用實(shí)例，但以下論文中使用了本抗體，敬請(qǐng)參考。

Koh, H. S., et al.: Nat. Commun., 6(1),1(2015).
The HIF-1/glial TIM-3 axis controls inflammation-associated brain damage under hypoxia.

參考文獻(xiàn)