婷婷久久无码欧美人妻,最近中文字幕免费mv2018在线

參考價	面議

供貨周期	一個月以上	應用領域	醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

詳細介紹

DNA特異性細胞核實時成像試劑

NucleoSeeing ＜Live Nucleus Green＞

NucleoSeeing是與DNA特異性結合并發(fā)出綠色熒光的實時成像用細胞核染色試劑。不僅是動物細胞和組織，擬南芥的葉細胞中也顯示出高S/N比，并可很好的觀察活細胞中細胞核動態(tài)。另外，還可用作細胞核pH sensor。

※本產(chǎn)品基于名古屋工業(yè)大學的研究成果商品化而成。

※本產(chǎn)品僅供科研使用。嚴禁用于科研以外用途。

使用了NucleoSeeing的各種樣本的染色案例

將HeLa細胞（左），擬南芥表皮細胞和保衛(wèi)細胞（中），小鼠腦海馬切片培養(yǎng)（右）活細胞成像后進行觀察。詳情請參考各個案例的數(shù)據(jù)。

◆活細胞的細胞核成像

MEMO

細胞核作為DNA的儲存庫負責細胞分裂和控制基因表達，是細胞中重要的細胞器之一。因此細胞核動力學的動態(tài)實時成像就成為了非常重要的課題。從以前開始就開發(fā)了各種核染色試劑，雖然核酸應答性的藍色熒光色素Hoechst系列和DAPI被廣泛運用，但由于這些藍色熒光素使用紫外線作為激發(fā)光，光毒性強，存在不適用于活細胞成像的問題。近，雖然開發(fā)了一些適用于活細胞的核染料，如綠色和紅色熒光色素，但是化合物的細胞毒性和核染色的特異性仍然存在問題。

NucleoSeeing是名古屋工業(yè)大學的筑地真也教授等人開發(fā)的DNA特異性綠色熒光化合物，可以在細胞培養(yǎng)，組織培養(yǎng)以及擬南芥葉等的植物細胞中進行活細胞成像。本產(chǎn)品細胞毒性低，DNA特異性顯示高S/N比，以及優(yōu)異的細胞核染色性能。也可用于觀察固定細胞，應用靈活。另外，由于其擁有特殊的pH依存性熒光特性，還可以用作細胞核特異性的pH sensor。近年，在細胞核內(nèi)pH重要性的研究中，還可以期待本產(chǎn)品作為核內(nèi)pH檢測的試劑。

各種細胞核染料的比較參數(shù)

染色試劑名稱	光特性			化合物的物性			觀察方法
染色試劑名稱	檢測波長激發(fā)/熒光（nm）	熒光色	光毒性	核特異性	細胞膜滲透性	細胞毒性	活細胞	固定細胞
NucleoSeeing	488 / 520	綠	無	?	?	無	?	?
Hoechst	350 / 461	藍	有	?	?	有	?	?
DAPI	350 / 461	藍	有	?	×	不明	×	?
X公司產(chǎn)品	485 / 498	綠	?	△	?	不明	?	?
Y公司產(chǎn)品	646 / 680	紅	?	?	?	有	?	?

◆原理

NucleoSeeing是細胞膜滲透性的綠色核染色試劑，由綠色熒光色素和DNA特異性結合tag組成。本產(chǎn)品在DNA不存在時顯示折疊構造，雖然有消光狀態(tài)，但與DNA結合時構造發(fā)生改變，發(fā)出綠色熒光。由于NucleoSeeing攝入細胞內(nèi)后與DNA結合時發(fā)出綠色熒光，因此可以特異性觀察細胞核。

◆特點

●　僅在與DNA結合時發(fā)出綠色熒光，顯示高S/N比。由于在培養(yǎng)基中會消光，因此在添加了培養(yǎng)基的狀態(tài)下

●　也可以高靈敏度地進行觀察

●　※想要提高靈敏度，則建議染色后更換培養(yǎng)基后再進行觀察。

●　激發(fā)光/發(fā)射光波長：488 nm/520 nm

●　和傳統(tǒng)的Hoechst等試劑相比，幾乎沒有發(fā)現(xiàn)細胞毒性。

●　不僅僅是活細胞成像，還可以染色固定細胞，活細胞成像后再固定細胞進行觀察，也可以用于免疫染色實驗。

●　無論是動物來源的細胞和組織培養(yǎng)，還是植物細胞（擬南芥葉細胞），都可以進行高S/N比的核染色。

●　觀察植物細胞時，不受葉綠體來源的自身熒光（Em：>615 nm）的影響，可以僅將細胞核可視化。

●　能夠可逆性染色。培養(yǎng)基更換12~24小時后，染料幾乎全部被排出細胞外。

●　由于可以看見pH依賴性的熒光強度的變化，所以在pH 6~8之間，可以通過2個波長的熒光強度比

●　（Ex 405 nm, Em 520 nm / 460 nm），作為細胞核內(nèi)的pH sensor使用。

◆應用

●　動物來源培養(yǎng)細胞的活細胞成像

●　植物細胞的活細胞成像

●　免疫染色中的細胞核染色

●　細胞核內(nèi)pH sensor（pH 6~8）

◆原著論文

※ 本產(chǎn)品NucleoSeeing是以下論文中的hoeAc₂FL。

Nakamura, A., et al., Chem. Commun., 50, 6149～6152 (2014)

"Hoechst tagging: a modular strategy to design synthetic fluorescent probes for live-cell nucleus

imaging."

Ueda, M., et al., ACS Cent. Sci., 3 (5), 462～472 (2017)

"Noncanonical function of a small-molecular virulence factor coronatine against plant immunity: an

in vivo raman imaging approach."

Nakamura, A. and Tsukiji, S., Bioorg. Med. Chem. Lett., 27 (14), 3127～3130 (2017)

"Ratiometric fluorescence imaging of nuclear pH in living cells using hoechst-tagged fluorescein."

◆應用實例

DNA應答性的熒光特性和細胞核特異性染色

左：NucleoSeeing僅在DNA存在時顯示出強的綠色熒光。激發(fā)光488 nm。

右：在活細胞中，與DNA特異性結合的Hoechst33342（藍）和NucleoSeeing（綠）進行共染色的結果，

右：顯示出高度的一致性。

圖片.png

細胞毒性

作為藍色核染色試劑被廣泛使用的Hoechst33342和NucleoSeeing，利用MTT法確認其細胞毒性。Hoechst在5 μM時觀察到了顯著的細胞死亡，而NucleoSeeing在5 μM時還未觀察到細胞毒性。

圖片.png

可逆性染色

為了評價Hoechst33342和NucleoSeeing的細胞滯留性，分別用1 μM兩種試劑處理15分鐘后，更換培養(yǎng)基，去除剩余的試劑，觀察24小時熒光強度的變化。Hoechst33342在24小時后依然維持80%的熒光強度，顯示出不可逆性，與之相對NucleoSeeing隨著時間推移，熒光強度逐漸減弱，12小時以后幾乎全部排出。因此，NucleoSeeing可以作為可逆性的核染色試劑使用。

圖片.png

各種培養(yǎng)細胞的核染色

添加1 μM的 NucleoSeeing 至各種培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基中，染色15分鐘后，更換培養(yǎng)基觀察活細胞，無論哪種細胞都觀察到了核特異性的信號。

圖片.png

小鼠腦（海馬）切片培養(yǎng)組織的染色案例

添加20 μM 的NucleoSeeing至小鼠腦海馬切片培養(yǎng)組織的培養(yǎng)基中，染色15分鐘后，更換培養(yǎng)基在未固定的條件下進行觀察。

圖片.png

固定細胞的染色案例

左：用4%多聚甲醛固定處理HeLa細胞后，用PBS清洗細胞，添加1 μM的 NucleoSeeing染色15分鐘。染色后，

右：清洗并觀察。

右：添加5 μM 的NucleoSeeing染色15分鐘，用4%多聚甲醛固定細胞并進行觀察。

右：※雖然也可用甲醇進行固定，但信號可能會減弱。

圖片.png

擬南芥葉的保衛(wèi)細胞染色案例

用20 μM 的NucleoSeeing處理擬南芥葉的切片60分鐘后，清洗切片進行觀察。激發(fā)光為488 nm時，在綠色熒光范圍490~555 nm內(nèi)觀察保衛(wèi)細胞的細胞核，615 nm以上波長范圍中觀察到葉綠體來源的自身熒光。通過使用本試劑，可以在觀察時區(qū)分葉綠體的自身熒光和細胞核熒光，期待本品可作為植物細胞的核動態(tài)成像試劑使用。

※擬南芥葉的保衛(wèi)細胞的核染色是由名古屋工業(yè)大學的筑地教授等人和東北大學上田實教授等人共同研究發(fā)現(xiàn)的成果。

Ueda, M., et al., ACS Cent. Sci., 3 (5), 462～472 (2017)

"Noncanonical function of a small-molecular virulence factor coronatine against plant immunity: an

in vivo raman imaging approach."

擬南芥葉表皮細胞的染色案例

用20 μM的 NucleoSeeing處理擬南芥葉的切片60分鐘后，清洗切片進行觀察。確認表皮細胞的核特異性染色。

圖片.png

◆使用NucleoSeeing作為核內(nèi)pH sensor

細胞核有著由外膜和內(nèi)膜這兩層脂質雙分子層膜構成的核膜這種*結構，與細胞質分隔開來。細胞核內(nèi)和細胞質之間的物質交流需要通過細胞核孔進行，但學者們認為細胞核內(nèi)的環(huán)境和細胞質的環(huán)境是不同的。近年，有學者提出核膜中存在核膜特異性質子泵（H⁺-ATPase），在細胞核和細胞質之間產(chǎn)生質子梯度。雖然可以期待通過生理現(xiàn)象變化來檢測細胞核內(nèi)的pH值，但是至今還沒有開發(fā)出十分理想的試劑。

名古屋工業(yè)大學筑地教授等人證明NucleoSeeing具有pH依賴性熒光特性，可以作為細胞核傳感器使用。NucleoSeeing作為細胞核染色試劑，一般在激發(fā)光480 nm/熒光520nm的范圍使用，但是在激發(fā)光405 nm時使用的話，在460 nm以及520 nm左右的熒光會依賴pH值發(fā)生變化。通過檢測激發(fā)光405 nm時460 nm和520 nm的熒光強度比（F520 / F460），觀察pH5.5～8.5之間的S形曲線。利用這個原理，就可以評估細胞核內(nèi)的pH值。

■　原著論文

Nakamura, A. and Tsukiji, S., Bioorg. Med. Chem. Lett., 27 (14), 3127～3130 (2017)

"Ratiometric fluorescence imaging of nuclear pH in living cells using hoechst-tagged fluorescein."

◆NucleoSeeing用作細胞核內(nèi)pH sensor的原理和特點

（參考數(shù)據(jù)）in vitro中NucleoSeeing的pH依賴性熒光特性

左：在NucleoSeeing的激發(fā)波長405 nm時熒光光譜和pH依賴性。在pH5.5~8.5之間，460 nm和520 nm附近的

左：熒光強度隨著pH值降低而增強。

右：在各pH值中，460 nm和520 nm的熒光強度F（激發(fā)波長405 nm）和熒光強度比(F520 / F460)。

<注>NucleoSeeing針對活細胞用的細胞膜滲透性進行了優(yōu)化，攝入細胞內(nèi)以后，被酯酶水解并轉化為活性本體。本數(shù)據(jù)是為了驗證使用了化學合成的活性本體（NucleoSeeing的水解產(chǎn)物）進行in vitro獲得的數(shù)據(jù)。請注意直接使用NucleoSeeing進行in vitro不可能重現(xiàn)本數(shù)據(jù)。

圖片.png