化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
蛋白聚集小體檢測
ProteoStat® Aggresome detection kit
◆原理
聚集小體（Aggresome）是由一群不正常堆疊在一起的蛋白質(zhì)所形成的包涵體（Inclusion Bodies）。聚集小體的出現(xiàn)往往也表明細(xì)胞正處于某種應(yīng)激狀態(tài)，比如高溫、病毒感染、活性氧自由基攻擊等。聚集體通過隔離毒性，聚集蛋白質(zhì)，還可以通過自噬促進(jìn)細(xì)胞代謝。提供細(xì)胞保護(hù)功能。
研究人員人文與人類疾病相關(guān)的某些細(xì)胞包涵體來自于聚集小體的反應(yīng)，包括與阿爾茨海默氏病相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)外的聚集小體、與帕金森氏病的神經(jīng)元相關(guān)的路易體、與酒精性肝病的干細(xì)胞相關(guān)的馬洛里小體、與肌萎縮側(cè)索硬化癥（ALS）的星形膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)透明包涵體。PROTEOSTAT® 聚集小體檢測試劑盒提供了一種快速、特異、定量的方法來識別一個真正的細(xì)胞環(huán)境相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病抑制劑。該固定的細(xì)胞檢測不需要具備生理活性的蛋白突變體或基因工程的細(xì)胞株。PROTEOSTAT® 染料已經(jīng)在廣泛的條件下驗(yàn)證，與小分子調(diào)節(jié)劑一起使用，適用于具有治療價值的化學(xué)物的篩選。優(yōu)化抗體共定位研究，確定聚集蛋白物質(zhì)、自噬細(xì)胞和聚集小體的形成中涉及各種蛋白之間的相互作用。
◆試劑盒組成
試劑 | 包裝 |
ProteoStar™ Aggresome Detection Reagent | 10 μL |
Hoechst 33342 Nuclear Stain | 50 μL |
Proteasome Inhibitor (MG-132) | 120 nM |
10X Assay Buffer | 25 mL |
◆優(yōu)點(diǎn)?特色
1、特點(diǎn)
● 可靠、簡便、準(zhǔn)確的檢測細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)聚集反應(yīng)。
● 采取了細(xì)胞固定檢測方法，該方法是抗體共定位研究的優(yōu)選方法。
● 可用于流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。
● 基于細(xì)胞的靈敏的藥物反應(yīng)分析方法。
● 不需分離目的的蛋白或稀釋樣品與常規(guī)緩沖液兼容
● 在熒光微孔板中即可進(jìn)行簡單、靈敏、均一地檢測
● 可與其他檢測手段聯(lián)用，獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果
● 可檢測不同蛋白的聚集
● 可檢測蛋白多肽聚集程度，可用于篩選蛋白
● 與傳統(tǒng)蛋白聚集檢測染料相比更靈敏，信號更明亮
● 聚集激活劑或抑制劑
● 在寬pH（4-10）和寬離子強(qiáng)度范圍都可使用
2、優(yōu)點(diǎn)
● 檢測樣品不需要具備生理活性的蛋白突變體或基因工程的細(xì)胞株。
● 能夠識別在聚集小體形成時聚集的蛋白和與其相關(guān)聯(lián)的蛋白的相互作用。
● 適用于具有治療價值的化學(xué)物的篩選。
● *實(shí)現(xiàn)了聚集小體積累的簡易定量分析。
● 有助于在細(xì)胞環(huán)境中檢測神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的聚集抑制劑。
◆案例?應(yīng)用 本產(chǎn)品試用的樣品請看相關(guān)資料！
● 使用例 1：流式細(xì)胞術(shù)檢測聚集小體
| 大動肝 |
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| 用0.2% DMSO模擬培育Jurkat細(xì)胞或在37℃下用5 µM的MG-132過夜培育。然后，用proteostat® 染料孵育和固定細(xì)胞，不需清洗然后直接通過流式細(xì)胞儀，在FL3信道使用488 nm的激光進(jìn)行分析。在MG-132處理的細(xì)胞時，紅色熒光信號增加了約3倍。上述的操作會影響蛋白質(zhì)聚集小體的檢測。 | 用0.2% DMSO模擬培育Jurkat細(xì)胞或在37℃下用 5 µM的MG-132過夜培育。用熒光素p62 Ab (1:500稀釋原液)培育細(xì)胞。清洗細(xì)胞后，通過流式細(xì)胞儀在FL1信道使用488 nm的激光進(jìn)行分析。在MG132處理的細(xì)胞時，熒光素p62 Ab的抗體信號增加約2.5倍。 |
● 使用例 2：ProteoStat™ 染料與熒光染料的應(yīng)用
用5 μM MG-132培育帶有HeLa細(xì)胞的聚集小體12小時后（右圖），加入ProteoStat® 聚集小體染料（紅色）和用Hoechst33342復(fù)染，然后進(jìn)行觀察。未經(jīng)培育的聚集小體（左圖）。 |
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預(yù)先用5μMMG-132培育帶有HeLa細(xì)胞的聚集小體12小時后，用ProteoStat® 聚集小體染料來染色觀察（左上圖綠色部分）；與AlexaFluor® 647微管蛋白抗體（左下圖紅色部分）共定位；通過熒光顯微鏡觀察的合成圖像（右圖）。 |
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| 預(yù)先用5μMMG-132培育帶有HeLa細(xì)胞的聚集小體12小時，用ProteoStat® 聚集體小染料來染色觀察（左上圖），與熒光素p62的抗體（右上圖）共定位，通過熒光顯微鏡觀察的合成圖像（下圖）。 |
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● 使用例 3
不同攪拌速率對蛋白聚集的影響使用本產(chǎn)品檢測后，可知攪拌速度越快，蛋白聚集程度越大
● 使用例 4
蛋氨酸被氧化后可抑制蛋白聚集藍(lán)色曲線為對照，沒有攪拌；在攪拌速度在300 rpm下， 綠色曲線與紅色曲線分別表示蛋氨酸被氧化后的蛋白聚集情況。使用本產(chǎn)品檢測后，可知蛋氨酸被氧化后可抑制蛋白聚集。
● 使用例 5
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α-syn混合物形式聚集在被內(nèi)化到M17神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的細(xì)胞質(zhì)膜。用α-syn單體處理M17細(xì)胞，聲波處理α-SIGN PFFs或α-SYN混合物（M + F）。四天后，在固定M17細(xì)胞前，將其清洗3次，用 PROTEOSTAT® 聚合染料（綠色）染色和用抗α-syn（紅）和β連環(huán)蛋白（灰色）免疫染色。比例尺= 20 µm。作者提到“Fibril生長和播種量α-synuclein蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用。” |
● 使用例 6
在PROTEOSTAT® 聚集小體檢測試劑（A）和Hoechst 33342核染色（B）的激發(fā)和發(fā)射光譜。 |
● 使用例 7
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由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的自噬細(xì)胞產(chǎn)生的聚集小體和聚集小體類的包涵體，epi-熒光顯微成像圖。未經(jīng)處理的K562細(xì)胞（A）；加入5 mM MG-132溶液培育24小時（B）；加入50 mM CQ培育24小時（C）；加入100 nM毒胡蘿卜素（D）。在溫室下，用PROTEOSTAT® 染料(1:10,000稀釋)來固定染色細(xì)胞30分鐘。PROTEOSTAT® 的著色顯示 聚集體 和 ALIS呈紅色， DAPI 呈藍(lán)色。 |
● 使用例 8 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的細(xì)胞自噬產(chǎn)生蛋白聚集小體進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析
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分別25，50，75 mmCQ，100 nM的毒胡蘿卜素（TG）或5mM的MG-132處理K562細(xì)胞24小時。然后在溫室下用PROTEOSTAT® 染料（1：10,000稀釋）固定并透化培育細(xì)胞30分鐘。接著在BD LSR II的藍(lán)色610/20 nm的信道分析細(xì)胞（30,000）。 |
● 使用例 9
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分別使用毒胡蘿卜素（Tg，0.1 μM），25，50和75微米氯喹（CQ）處理K562 細(xì)胞24小時，來誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和不*自噬細(xì)胞。采用陽性對照，加入蛋白酶體抑制劑，鎂 132 (5 µM)培育 24小時。固定并透化沉淀的細(xì)胞。接著根據(jù)說明書的指示，在室溫下用 300 µL PROTEOSTAT® 聚集小體檢測試劑盒 （Enzo Life Sciences）培育細(xì)胞30分鐘，加入1 mg/L DAPI （用來測定細(xì)胞周期）。S值聚集小體小傾向的因子（APF）相對增加，G1和G2m的S值是通過每次細(xì)胞處理后檢測的結(jié)果和對照組相比而得出。S期和G1相比，ER 應(yīng)激誘導(dǎo)劑、Tg和 50 µM CQ的聚集小體數(shù)量呈上升趨勢，同時顯示蛋白酶體抑制劑，MG-132和50μMCQ下降的聚集小體數(shù)量在G2M S期比對照水平更低。 |
◆產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
| ENZ-51035-K100 | ProteoStat® Aggresome detection kit ProteoStat® 蛋白聚集小體檢測試劑盒 | 100 tests |
| ENZ-51035-0025 | 25 tests |
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