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詳細(xì)介紹
LabAssay™ ALP 
LabAssay™ 堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒
堿性磷酸酶的活性檢測(cè)試劑盒，常用于檢測(cè)培養(yǎng)的成骨細(xì)胞、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清和骨組織中的堿性磷酸酶活性。堿性磷酸酶（ALP）廣泛分布于肝臟、骨和小腸之中。組織中酶活性的變化是成骨等生理現(xiàn)象的重要標(biāo)志。在骨代謝研究領(lǐng)域被用作骨形成指標(biāo)之一。
本產(chǎn)品是以對(duì)硝基苯磷酸鹽為底物的堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒，通過(guò)使用酶標(biāo)儀進(jìn)行多樣品檢測(cè)。
◆檢測(cè)原理
堿性磷酸酶存在下，碳酸鹽緩沖溶液（pH 9.8）中的對(duì)硝基苯磷酸鹽分解成對(duì)硝基苯酚和磷酸，產(chǎn)生的對(duì)硝基苯酚在堿性條件下呈黃色。通過(guò)測(cè)量405 nm處的吸光度，可以計(jì)算樣品中的堿性磷酸酶活性。
◆產(chǎn)品性能
檢測(cè)范圍：>0.06 mmol/L
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍：0.0625~0.5 mmol/L
重復(fù)性：C.V.<10%
樣品：血清（小鼠、大鼠、人）
所需樣品量：20 μL
檢測(cè)時(shí)間：約 20 min
檢測(cè)波長(zhǎng)：405 nm
◆試劑盒成分
底物片（溶解時(shí)對(duì)硝基苯基磷酸二鈉 6.7 mmol/L) | 10 片 |
底物溶解buffer （2.0 mmol/L 氯化鎂 含有 0.1 mol/L 碳酸鹽緩沖液 pH 9.8) | 50 mL × 1瓶 |
反應(yīng)終止液（0.2 mol/L氫氧化鈉溶液） | 50 mL × 1瓶 |
標(biāo)準(zhǔn)溶液 (0.5 mmol/L 對(duì)硝基苯酚溶液） | 5 mL × 1瓶 |
◆標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)示例
◆檢測(cè)操作方法
根據(jù)下表中的條件進(jìn)行反應(yīng)。
Test | 標(biāo)準(zhǔn) | 空白 | |
底物緩沖液 | 100 μL | 100 μL | 100 μL |
待測(cè)物 | 樣品 20 μL | 標(biāo)準(zhǔn)溶液 20 μL | 蒸餾水 20 μL |
孔板混勻儀中震蕩 1 min，37°C下孵育 15 min。 | |||
反應(yīng)終止液 | 80 μL | 80 μL | 80 μL |
孔板混勻儀中震蕩 1 min，使用酶標(biāo)儀測(cè)量 405 nm 處吸光度 | |||
◆數(shù)據(jù)
加標(biāo)回收測(cè)試
ALP的加標(biāo)回收測(cè)試，將已知含量的標(biāo)準(zhǔn)品加標(biāo)到人、小鼠、大鼠樣品中，n=2。
● 人血清樣品
添加量(mmol/L) | 平均值(mmol/L) | 回收量(mmol/L) | 回收率（%） |
－ | 0.429 | － | － |
0.097 | 0.527 | 0.098 | 101 |
0.197 | 0.587 | 0.158 | 80.2 |
0.297 | 0.672 | 0.243 | 81.8 |
0.507 | 0.866 | 0.437 | 86.2 |
● 小鼠血清樣品
添加量(mmol/L) | 平均值(mmol/L) | 回收量(mmol/L) | 回收率（%） |
－ | 0.284 | － | － |
0.060 | 0.343 | 0.059 | 98.3 |
0.127 | 0.399 | 0.115 | 90.6 |
0.251 | 0.507 | 0.223 | 88.8 |
0.500 | 0.753 | 0.469 | 93.8 |
● 大鼠血清樣品
添加量(mmol/L) | 平均值(mmol/L) | 回收量(mmol/L) | 回收率（%） |
－ | 0.374 | － | － |
0.060 | 0.439 | 0.065 | 108.3 |
0.127 | 0.483 | 0.109 | 85.8 |
0.251 | 0.598 | 0.224 | 89.2 |
0.500 | 0.855 | 0.481 | 96.2 |
◆稀釋線(xiàn)性度測(cè)試
使用隨附的緩沖液制備樣品，使其處于檢測(cè)范圍內(nèi)，用緩沖液連續(xù)梯度稀釋4次，并檢測(cè)結(jié)果。
● 人血清樣品
● 小鼠血清樣品
● 大鼠血清樣品
◆樣品檢測(cè)案例
● 人樣品
樣品 | 檢測(cè)值 (mean) | SD | CV (%) |
混合血清，男性 | 0.556 | 0.003 | 0.5 |
混合血漿(EDTA)，男性 | 0.07 | 0.001 | 1.2 |
※抗凝固劑的EDTA會(huì)產(chǎn)生負(fù)誤差，所以請(qǐng)不要使用。
● 小鼠樣品：CD-1(ICR)、雄性、血清
樣品 | 檢測(cè)值 (mean) | SD | CV (%) |
1 | 0.31 | 0.013 | 4.2 |
2 | 0.453 | 0.001 | 0.2 |
3 | 0.495 | 0.015 | 3 |
4 | 0.442 | 0.013 | 2.9 |
5 | 0.373 | 0.002 | 0.5 |
● 大鼠樣品：SD、雄性、血清
樣品 | 檢測(cè)值(mean) | SD | CV (%) |
1 | 0.538 | 0.005 | 1 |
2 | 0.441 | 0.01 | 2.2 |
3 | 0.357 | 0 | 0 |
4 | 0.46 | 0.002 | 0.5 |
5 | 0.301 | 0.011 | 3.6 |
單位：mmol/L，n=2
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| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 |
| 633-51021 | LabAssay™ ALP LabAssay™ 堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒 | 500 tests |
※ 產(chǎn)品已更新，舊編號(hào)為：291-58601
參考文獻(xiàn)
● Ito, S. et al. : J. Pharmacol. Exp. Ther., 333, 341 (2010). ※小鼠腎組織提取液
● Matsuyama, A. et al. : Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., 45, 75 (2018). ※MC3T3-E1細(xì)胞, C2C12細(xì)胞
● Chiba, T. et al. : J. Atheroscler. Thromb., 23, 1099 (2016). ※小鼠血漿
● Kohno, Y. et al. : Stem Cell Res. Ther., 8, 115 (2017). ※骨膜間充質(zhì)干細(xì)胞
● Iwakura, T. et al. : J. Orthop. Res., 27, 208 (2009). ※人培養(yǎng)細(xì)胞提取液
● Furuya, Y. et al. : J. Biol. Chem., 286, 37023 (2011). ※小鼠血清
● Itoh, T. et al. : J. Biol. Chem., 284, 19272 (2009). ※小鼠培養(yǎng)細(xì)胞提取液
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