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「LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit」「PYROSTAR™ Neo+」

富士膠片和光純藥株式會(huì)社（總部：大阪市中央?yún)^(qū)，社長：吉田光一）于2024年7月1日正式推出以下兩款新產(chǎn)品。包括in vitro¹檢測(cè)熱原的MAT法²用試劑盒——LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit（以下簡(jiǎn)稱LumiMAT™），其可作為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的替代方法；以及不含動(dòng)物來源成分的重組內(nèi)毒素檢測(cè)用試劑“PYROSTAR™ Neo+"。

在藥品和醫(yī)療器械的開發(fā)和生產(chǎn)過程中，需要使用動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以確保對(duì)人體的安全性和有效性。熱原檢測(cè)是對(duì)進(jìn)入人體血液后引起發(fā)熱、休克等生物反應(yīng)，甚至導(dǎo)致死亡的熱原進(jìn)行的檢測(cè)，對(duì)于確保非口服藥、注射器及導(dǎo)管等與血液直接接觸的醫(yī)療器械的安全性至關(guān)重要。熱原可分為內(nèi)毒素?zé)嵩头莾?nèi)毒素?zé)嵩憎c血為原料的LAL試劑³被用于檢測(cè)內(nèi)毒素，而家兔熱原實(shí)驗(yàn)⁴則常用于檢測(cè)非內(nèi)毒素?zé)嵩廴尽＿@些檢測(cè)方法已被列入日本、歐洲、美國等國家的藥典，但近年來，隨著對(duì)使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的倫理關(guān)注以及對(duì)生物多樣性保護(hù)的日益重視，改用不依賴動(dòng)物的替代法的呼聲日益高漲。

本次推出的LumiMAT™是in vitro檢測(cè)熱原的MAT法用試劑盒，可替代家兔熱原實(shí)驗(yàn)。歐洲決定在2026年前從歐洲藥典中刪除家兔熱原實(shí)驗(yàn)，其它地區(qū)也可能采取相同措施。因此，關(guān)于改用MAT法的討論愈發(fā)活躍。

目前市售的MAT法用試劑大多使用了血液來源的PBMC⁵（外周血單核細(xì)胞），通過ELISA法檢測(cè)熱原暴露時(shí)單核細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子，從而檢測(cè)樣品中的熱原。但該方法存在PBMC的批次間差異和分析時(shí)間長的問題。另外，還需要人的血液作為原料，因此還存在原料穩(wěn)定性方面的問題。而FUJIFILM Wako開發(fā)的LumiMAT™采用了從多種細(xì)胞系⁷中篩選、對(duì)熱原具有高靈敏度的NOMO-1細(xì)胞⁸。通過培養(yǎng)細(xì)胞系增殖進(jìn)行生產(chǎn)，因此批次間差異小、獲得更可靠的檢測(cè)結(jié)果的同時(shí)，也提高了原料的來源穩(wěn)定性，可穩(wěn)定供應(yīng)。而檢測(cè)方法采用了可檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子NF-κB^９激活情況的熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)法¹⁰，可簡(jiǎn)單快速得到結(jié)果。傳統(tǒng)的MAT法需要約1.5天才能得到結(jié)果，而LumiMAT™ 僅需5 h左右即可完成檢測(cè)。

LumiMAT™采用NanoLuc^®技術(shù)。NanoLuc^® 技術(shù)由Promega Corporation授權(quán)。授權(quán)專-利：美國專-利第8557970號(hào)、美國專-利第8669103號(hào)以及與美國專-利第8557970號(hào)、美國專-利第8669103號(hào)享有同等優(yōu)先權(quán)的所有專-利及申請(qǐng)中的專-利。NanoLuc^® 為Promega Corporation的注冊(cè)商標(biāo)。

另外，同時(shí)推出的重組內(nèi)毒素檢測(cè)試劑PYROSTAR™ Neo+，由構(gòu)成鱟內(nèi)毒素反應(yīng)機(jī)制¹¹的三因子（鱟C因子、B因子和凝固酶原）的人工合成的基因重組蛋白組成，利用顯色法¹²原理，可高精度檢測(cè)內(nèi)毒素含量。PYROSTAR™ Neo+不僅保留了PYROSTAR™ Neo（于2021年12月推出）的高靈敏度和溶解后優(yōu)異的穩(wěn)定性，還降低了因某些藥物引發(fā)的干擾反應(yīng)、提高了對(duì)天然內(nèi)毒素的反應(yīng)性能，可適用于更多樣品。本產(chǎn)品兼容多種內(nèi)毒素檢測(cè)設(shè)備，不僅可用于醫(yī)療藥品和醫(yī)療器械認(rèn)證申請(qǐng)時(shí)的安全性評(píng)估，還可廣泛用于質(zhì)量管理，如藥品的原料檢查以及藥品生產(chǎn)用水的水質(zhì)管理等。

PYROSTAR™ Neo＋

FUJIFILM Wako通過開發(fā)和銷售以上產(chǎn)品，以滿足不依賴動(dòng)物的熱原檢測(cè)需求，今后也將繼續(xù)以 "助力未來科學(xué)研究，創(chuàng)造人類幸福源泉 "為使命，開發(fā)和提供能夠滿足社會(huì)和客戶需求的高功能、高品質(zhì)產(chǎn)品，在醫(yī)療和其他領(lǐng)域?yàn)楣I(yè)生產(chǎn)和科研發(fā)展做出貢獻(xiàn)。

◆MAT法的操作步驟

FUJIFILM Wako的LumiMAT™采用了熒光素酶告檢測(cè)法，細(xì)胞因子無需持續(xù)培養(yǎng)至ELISA法檢測(cè)所需濃度，因此可更便捷地得到檢測(cè)結(jié)果。分析時(shí)間可從普通MAT法的約1.5天，縮短至約5h。

注釋

1. 在培養(yǎng)容器等中對(duì)人/動(dòng)物的細(xì)胞或組織進(jìn)行的檢測(cè)。

2. Monocyte Activation Test（單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定法）的縮寫。利用人單核細(xì)胞被熱原激活后產(chǎn)生的炎癥因子等物質(zhì)檢測(cè)熱原。

3. Limulus Amebocyte Lysate（鱟血變形細(xì)胞裂解物）的縮寫，從鱟血細(xì)胞提取物中制備的內(nèi)毒素檢測(cè)用試劑。

4. 向家兔靜脈中注射樣品，觀察其體溫變化以確認(rèn)是否存在熱原。

5. Peripheral Blood Mononuclear Cells（外周血單個(gè)核細(xì)胞），從外周血中分離的單核細(xì)胞。

6. Enzyme-linked immuno-sorbent assay（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）的縮寫。使用特異性抗體或抗原捕獲樣品溶液中的目標(biāo)抗原或抗體時(shí)，利用酶促

     反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)和定量的方法。

7. 細(xì)胞系是指能夠長期穩(wěn)定地進(jìn)行增殖和培養(yǎng)的細(xì)胞。

8. 人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系。

9. Nuclear Factor kappa B（核因子κB）的縮寫，是調(diào)節(jié)與免疫和炎癥反應(yīng)等相關(guān)的基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。

10. 熱原與細(xì)胞的Toll-like Receptor（TLR）結(jié)合后會(huì)激活NF-κB，隨后誘導(dǎo)報(bào)告細(xì)胞表達(dá)熒光素酶蛋白，因此可通過測(cè)定與發(fā)光底物的發(fā)光反應(yīng)強(qiáng)

      度來檢測(cè)熱原。

11. 鱟的一種生物防御機(jī)制，體液與內(nèi)毒素發(fā)生反應(yīng)時(shí)會(huì)凝固。內(nèi)毒素會(huì)連續(xù)激活鱟的血細(xì)胞成分—C因子、B因子和凝血酶前體，最終使體液凝

      固。

12. 檢測(cè)內(nèi)毒素的方法之一。鱟試劑中的合成底物與內(nèi)毒素反應(yīng)后被分解而發(fā)生顯色反應(yīng)。

◆產(chǎn)品列表

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