EPI400 Chemically Competent Cell

產品規(guī)格

EPI400:                                                          100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                      10μl

保存條件（保質期）：                          -80℃（6個月）

基因型

F^- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ^- rpsL (Str^R) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

EPI400 Chemically Competent Cell產品說明

EPI400來源于EC100菌株，將EC100核基因中控制質粒拷貝數(shù)的pcnB基因刪除后引入一個誘導啟動子驅動的pcnB基因,即是EPI100菌株。EPI400菌株可以降低質粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定DNA或毒性基因的克隆，在加入WDEPI-誘導劑 I 后又可以提高質粒產量到正常狀態(tài)。[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA 。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。lacZΔM15 標記的存在使EPI400可用于藍白斑篩選，tonA賦予其抗噬菌體T1和T5的能力，rpsL賦予其鏈霉素抗性。EPI400感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率可達5×10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1. EPI400感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15 h。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化。插入冰中10分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。