BL21 Star(DE3)pLysS Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格 

BL21 Star(DE3)pLysS：                               100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個月） 

基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS (Cam^R)

BL21 Star(DE3)pLysS Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

BL21 Star(DE3)pLysS菌株來源于BL21(DE3)，含有rne131突變（RNaseE基因），RNaseE基因的突變降低了內(nèi)源RNase的積累，增強(qiáng)菌株細(xì)胞內(nèi)mRNA的穩(wěn)定性，從而提高異源蛋白的表達(dá)水平。主要適用于T7啟動子表達(dá)載體(如pET系列)的高水平蛋白表達(dá)，同時含有大腸桿菌RNA聚合酶，也可用于非T7啟動子表達(dá)載體（pGEX，pMAL等）的蛋白表達(dá)。由于BL21 Star(DE3)菌株的異源基因基礎(chǔ)表達(dá)水平較高，所以不適合毒性蛋白的表達(dá)。BL21 Star(DE3)pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，還可與T7 RNA聚合酶結(jié)合抑制其轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。pLysS質(zhì)粒含有p15A復(fù)制起始子，可以和含有 pUC或pBR322等復(fù)制起始子的質(zhì)粒兼容。BL21 Star(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1. BL21 Star(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒并用手打EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。