BL21 Star(DE3) Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

BL21 Star(DE3)：                                        100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個(gè)月） 

基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm rne131 (DE3)

BL21 Star(DE3) Chemically Competent Cell產(chǎn)品說(shuō)明

BL21 Star(DE3)菌株源于BL21(DE3)菌株，含有rne131突變（RNaseE基因），RNaseE基因的突變降低了內(nèi)源RNase的積累，增強(qiáng)菌株細(xì)胞內(nèi)mRNA的穩(wěn)定性，從而提高異源蛋白的表達(dá)水平。主要適用于T7啟動(dòng)子表達(dá)載體(如pET系列)的高水平蛋白表達(dá)，同時(shí)含有大腸桿菌RNA聚合酶，也可用于非T7啟動(dòng)子表達(dá)載體（pGEX，pMAL等）的蛋白表達(dá)。由于BL21 Star(DE3)菌株的異源基因基礎(chǔ)表達(dá)水平較高，所以不適合毒性蛋白的表達(dá)。BL21 Star(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)10⁸cfu/μg DNA。

操作方法

1.  BL21 Star(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2.  42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基(2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.  5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.  將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。