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ClearColi K12 Electroporation-Competent Cell

參   考   價(jià): 1350

訂  貨  量: ≥1  臺

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時(shí)間:2020-09-03 15:45:28瀏覽次數(shù):754次

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純度 99.99% 供貨周期 現(xiàn)貨
規(guī)格 50μl/支 貨號 XY9048
應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) 主要用途 ClearColi K12電擊感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化,不能用于熱激轉(zhuǎn)化。Cl
ClearColi K12 Electroporation-Competent Cell只能用于電擊轉(zhuǎn)化,不能用于熱激轉(zhuǎn)化。ClearColi K12菌株來源于K12 endA- recA-菌株。在K12 endA- recA-菌株中引入突變,導(dǎo)致ClearColi K12細(xì)胞壁外層的脂多糖(LPS)被修飾:LPS的低聚糖鏈被刪除,同時(shí)LPS的兩個(gè)?;溡脖粍h除

ClearColi K12 Electroporation-Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

ClearColi K12 Electro  Cell                                       50μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                               10μl

恢復(fù)培養(yǎng)基                                                               50ml/瓶

保存條件(保質(zhì)期):                                        -80℃(6個(gè)月)

 

基因型

Fλ?endA?recAfrr181 msbA52 ?gutQ ?kdsD ?lpxL ?lpxM ?pagP ?lpxP ?eptA

ClearColi K12 Electroporation-Competent Cell產(chǎn)品說明

ClearColi K12電擊感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化,不能用于熱激轉(zhuǎn)化。ClearColi K12菌株來源于K12 endA- recA-菌株。在K12 endA- recA-菌株中引入突變,導(dǎo)致ClearColi K12細(xì)胞壁外層的脂多糖(LPS)被修飾:LPS的低聚糖鏈被刪除,同時(shí)LPS的兩個(gè)酰基鏈也被刪除,進(jìn)而破壞了ClearColi K12大腸桿菌的內(nèi)毒素信號通路,使得從該細(xì)胞中提取的蛋白或質(zhì)粒DNA中的內(nèi)毒素含量極低,提取的無內(nèi)毒素質(zhì)粒廣泛應(yīng)用于后續(xù)的哺乳動物細(xì)胞轉(zhuǎn)化。ClearColi K12同時(shí)缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)和重組酶 (recA),提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量。開發(fā)的ClearColi K12電擊感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×10cfu/μg DNA。

 

操作方法

1. 0.1 cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實(shí)冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。

2. 取-80℃保存的ClearColi K12電擊感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5 分鐘,待其融化,加入目的DNA ,并用手打EP管底輕輕混勻,避免產(chǎn)生氣泡,立即插入冰中。

    A. 測定轉(zhuǎn)化效率使用1 μl 10 pg/μl的對照質(zhì)粒 pUC19;

    B. 對于未知來源或組分不明的質(zhì)粒DNA,請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM              EDTA)重懸,DNA濃度不超過100 ng/μl,體積不超過5 μl/50 μl感受態(tài)。

3. 用200 μl槍頭(用刀切除0.5cm槍尖)將感受態(tài)-DNA混合物快速移到電擊杯中,避免產(chǎn)生氣泡,蓋上杯蓋。

4. 啟動電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù):C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此為BioRad 電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù),也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的參數(shù)操作),將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,電擊完成快速插入冰中。

5. 2分鐘后從冰中取出電擊杯,放室溫,加入1ml不含抗生素的無菌恢復(fù)培養(yǎng)基(室溫),用1ml 槍吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后,轉(zhuǎn)移到50 ml離心管(BD Falcon 50 ml錐形離心管等),向離心管中補(bǔ)加恢復(fù)培養(yǎng)基(室溫)至10 ml。37℃,225 rpm復(fù)蘇60分鐘。

6. 5000 rpm離心一分鐘收菌,重懸后取100-200 μl涂布到含相應(yīng)抗生素的LB(務(wù)必使用高鹽培養(yǎng)基平板,不可用2YT,SOB,SOC等低鹽培養(yǎng)基)平板上(因菌量較大,若全部涂板請選用直徑15cm培養(yǎng)皿2-5個(gè))。將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36-48小時(shí)(培養(yǎng)24小時(shí)后可看到很小的克?。?/p>

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