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產(chǎn)品型號
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時(shí)間:2020-09-03 15:46:12瀏覽次數(shù):577次
聯(lián)系我時(shí),請告知來自 化工儀器網(wǎng)DH5α Chemically Competent Cell
XL10-Gold Chemically Competent Cell
DB3.1 Electroporation-Competent Cel
DB3.1 Chemically Competent Cell
純度 | 99.99% | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
---|---|---|---|
規(guī)格 | 50μl/支 | 貨號 | XY9086 |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) | 主要用途 | GV3101菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif,為 |
GV3101 Electroporation-Competent Cell
產(chǎn)品規(guī)格
GV3101 Elec: 50μl/支
pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl ) 10μl
保存條件(保質(zhì)期): -80℃(12個(gè)月)
基因型
C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline
GV3101 Electroporation-Competent Cell產(chǎn)品說明
GV3101菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽:gent,賦予GV3101菌株慶大霉素抗性,適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作。開發(fā)的GV3101電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化:經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒 (size:11633 bp)檢測轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA;經(jīng)pCAMBIA2301-ZH質(zhì)粒 (size:40 kd)檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×103 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實(shí)冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,待其融化,加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(體積不大于6ul,感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率較高,次使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量),用手管底混勻,立即插入冰中,用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?;旌衔锟焖僖频诫姄舯?,蓋上杯蓋,空管保留待用。
3. 啟動電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù):C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此參數(shù)為Biorad 推薦,使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作),將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,電擊完成快速插入冰中,加入700 μl無抗生素的LB并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中,28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
(當(dāng)平板只含有50 μg/ml kan 時(shí),28℃培養(yǎng)48 h即可;平板中同時(shí)加入50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 時(shí),需28℃培養(yǎng)60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90 h)。
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