BY4741 Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

BY4741 Competent Cell:                                      100μl/支             保存： -80℃（3個月）

pYES2 (control vector, 10 ng/μl)                               10μl              保存：-80℃（12個月）

Carrier DNA (10 μg/μl)                                             100μl              保存：-20℃（12個月）

PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存：    4℃（12個月）

基因型

MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52

BY4741 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

BY4741菌株來源于釀酒酵母原始菌株——S288C，是實驗室的常用菌株，為配子MATa型，廣泛應用于鈉，鉀離子平衡；細胞抗鹽；各種金屬離子的吸收；重金屬毒性；各種糖類，碳源對真核生物細胞生長的影響；過氧化物，超氧化物的吸收與運輸?shù)难芯恐?。BY4741釀酒酵母為組氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株，可直接通過PEG/LiAc將pYES2質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進入BY4741細胞內(nèi)。質(zhì)粒pYES2的篩選標志為URA，可用SD-URA板板進行篩選。生產(chǎn)的BY4741感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，-80℃可保存三個月，pYES2質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>10³ cfu/μg DNA。

操作方法

1. 取100 µl冰上融化的BY4741感受態(tài)細胞，依次加入預冷的目的質(zhì)粒1-3 µg，Carrier DNA (96℃水浴3 min，快速冰浴

3 min，重復一次) 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打幾次混勻，30℃水浴30 min (15 min時翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。

2. 將感受態(tài)移到42℃水浴15 min (7.5 min時翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。

3. 5000 rpm離心 40 s棄上清，ddH₂O 400 µl 重懸，離心 30s棄上清。

4. ddH₂O 50 µl重懸，涂板，29℃培養(yǎng)48-96 h。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞在冰上融化。

2. 若使用pYES2質(zhì)粒表達蛋白，需在培養(yǎng)基中加入2%的半乳糖（篩選培養(yǎng)基中不用加半乳糖；當需要目的蛋白表達時，需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源），以誘導目的基因的表達。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。

4. 同時轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)粒時可增加質(zhì)粒的用量。

5. 酵母為真核生物，不易長期保存，隨感受態(tài)在-80℃保存時間的延長，轉(zhuǎn)化效率會不斷下降，建議保存時間不超過90天。

6. BY4741酵母菌株對高溫敏感，適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉(zhuǎn)化效率呈指數(shù)下降。

7. 酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48 h培養(yǎng)可見直徑1 mm克??；涂SD單缺平板29℃，48-60 h培養(yǎng)可見直徑1 mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80 h培養(yǎng)可見直徑1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培養(yǎng)可見直徑1 mm克隆。