人白介素1受體1(IL-1R1)檢測試劑盒

本試劑盒采用夾心法酶聯(lián)免疫吸附法，用于體外定量分析人血清、細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL1R1的含量。預(yù)先包被的抗體和檢測相抗體都是IL1R1單克隆抗體。檢測相抗體經(jīng)生物素標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人IL1R1呈正相關(guān)。

檢測指標(biāo)：IL-1R1；IL1R1
檢測范圍：125pg/ml～8000pg/ml
特異性：系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)
敏感性：＜10pg/ml

產(chǎn)品組成：

儲存條件：2-8℃（頻繁使用時），-20℃（長時間不用時）。
有效期：6個月(4℃)；12個月（-20℃）。

參考標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)：(取自某一批次質(zhì)檢數(shù)據(jù)，僅供參考，用戶需要自己建立標(biāo)準(zhǔn)曲線)

人白介素1受體1(IL-1R1)檢測試劑盒原理:

問：同一樣品多次活性測試結(jié)果差異大怎么解決？

答：樣本保存不當(dāng)，會導(dǎo)致多次實驗結(jié)果偏差較大，樣本應(yīng)盡量減少反復(fù)凍融，如需多次檢測，需在取樣后分裝保存。

問：檢測樣本是細(xì)胞培養(yǎng)上清，那么細(xì)胞數(shù)目對炎癥因子的濃度有影響嗎？

答：有影響，所以不同樣本可以比較的前提條件是培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)水平接近一致。

問：請問標(biāo)曲是每次都要做嗎？

答：是的，每次實驗，孵育時間，洗板次數(shù)等等條件均不一樣，不同實驗的標(biāo)曲不能混用，做一次實驗需要做一次標(biāo)準(zhǔn)曲線，并且用當(dāng)次，同一塊板上的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果去計算板內(nèi)樣品的濃度，才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果。

答：是需要更換的，防止造成交叉污染，影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

問：有的wash buffer析出結(jié)晶后在37℃也不溶解，怎么辦？

答：可提高至55度，并多次搖晃。溶解后按比例稀釋即可使用。

問：測得的值都低于標(biāo)準(zhǔn)曲線的低值，是什么原因，應(yīng)該怎么解決？

答：原因較多，首先是檢查樣品是否稀釋倍數(shù)過高，降低稀釋比，直至直接加樣本原液，如還檢測不出，需排查原因，建議在實驗組別設(shè)置中添加陽性對照孔，用明確表達(dá)的樣品作為陽性對照，如果標(biāo)準(zhǔn)曲線及陽性樣品均可測得正常的表達(dá)濃度，則表明實驗成功，其余待測樣品表達(dá)含量低于檢測下限，按照0計算即可。這種情況尤其對于炎癥因子較為常見，在健康樣本中，表達(dá)含量極低。

問：因為檢測限的原因，同一塊ELISA板子，部分樣本稀釋，部分樣本1:10稀釋，部分1:20稀釋，這樣設(shè)置可行嗎？結(jié)果可以比較嗎？

答：可以比較，不同稀釋比例，是因為不同樣本間的表達(dá)差異較大，只要保證稀釋后的檢測樣品測量值準(zhǔn)確，還原回稀釋倍數(shù)后的濃度是可信的?？梢杂脕肀容^不同樣本的原始濃度差。

問：試劑盒里面有捕獲抗體么？

答：即用型ELISA試劑盒中，捕獲抗體已經(jīng)預(yù)包被至試劑盒中的ELISA板上，沒有單獨的捕獲抗體提供，直接使用ELISA板孵育稀釋后的樣本及標(biāo)準(zhǔn)品即可。

問：ELISA實驗中，檢測計算抗原的濃度，臨界值怎么確定？

答：根據(jù)曲線測定的濃度，建議落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間位置較好，極限不要超過標(biāo)準(zhǔn)曲線的上下限，如果超出較多，會影響計算結(jié)果準(zhǔn)確性，建議調(diào)整稀釋比例。

問：In vivo周期長的話，不太好做預(yù)實驗，怎么辦？

答：In vivo造模取樣后，可將樣品分裝，取一部分樣品做ELISA預(yù)實驗，剩余樣品再進(jìn)行正式實驗；如多批次實驗，操作較為一致，后續(xù)可取消預(yù)實驗，根據(jù)前期結(jié)果進(jìn)行ELISA實驗濃度設(shè)置。

問：做實驗前怎么知道待測血清中炎癥因子的范圍呢？多大是高多小是低？

答：需要根據(jù)文獻(xiàn)推測，一般在健康人樣本中，炎癥因子表達(dá)很低，接近ELISA檢測下限，樣品無需稀釋或1:1稀釋即可，如已知為炎癥疾病或造模樣本，可參考文獻(xiàn)，在預(yù)實驗中設(shè)置1:10-100（或更高）的稀釋比例，預(yù)實驗檢測后確定佳濃度進(jìn)行正式實驗。

問：ELISA實驗中的洗板步驟如果沒有洗板機(jī)，需要如何操作？

答：實驗室ELISA實驗做的較多，還是建議使用洗板機(jī)洗板，效果更好，也更方便控制。如果沒有洗板機(jī)，在洗板過程中，需要注意洗板液添加后不要從孔中溢出，在加洗板液后，靜置1-2min，甩干液體后，在吸水紙上大力拍干；重復(fù)三次。

問：ELISA實驗中，酶標(biāo)抗體識別的是哪個抗體？

答：在雙抗夾心法ELISA中，酶標(biāo)抗體識別的是檢測抗體，對檢測抗體進(jìn)行識別和酶標(biāo)記。

問：捕獲抗體如何包被在96孔板上？

答：如果選用的是即用型ELISA試劑盒，無需進(jìn)行抗體包被；如果是非即用型的ELISA試劑盒，首先，要選擇ELIS*別的板子，材質(zhì)應(yīng)為聚苯乙烯；然后用抗體包被液稀釋（pH9.6的碳酸鹽緩沖液或pH7.2的PBS或pH7-8的Tris-HCl）成工作濃度，然后每孔加100 μl稀釋后的捕獲抗體，室溫或4℃過夜包被，然后進(jìn)行洗板和封閉之后即可使用，如需長期保存，需要真空凍干后保存

問：ELISA實驗中的捕獲抗體和檢測抗體是同一個抗體么？

答：不是的，在雙抗夾心法ELISA實驗中，會同時用到捕獲抗體和檢測抗體，這兩個抗體是針對同一抗原蛋白的不同抗原位點的兩種抗體，這樣才可以同時結(jié)合抗原分子。

問： ELISA可以測DNA的表觀么？

答：不可以，ELISA是利用免疫學(xué)原理，定量檢測蛋白質(zhì)表達(dá)的技術(shù)。測DNA表觀遺傳學(xué)，主要是檢測DNA甲基化，可以選用ChIP技術(shù)。