產(chǎn)品簡介

核酸(nucleic acid)是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命的基本物質(zhì)之一，廣泛存在于所有動(dòng)植物細(xì)胞、微生物體內(nèi)，根據(jù)化學(xué)組成不同，核酸可分為脫氧核糖核酸(簡稱DNA)和核糖核酸(簡稱RNA)，核酸分子中含有一定比例的磷，DNA中磷含量為9.2%，RNA中磷含量為9.0%

核酸檢測(cè)試劑盒(定磷比色法)檢測(cè)原理是在強(qiáng)酸條件下，核酸分子中的有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷，后者與鉬酸銨形成黃色的磷鉬酸銨，隨后還原劑把高價(jià)鉬離子還原成低價(jià)鉬離子，進(jìn)而形成藍(lán)色的鉬藍(lán)，在一定濃度范圍藍(lán)色深淺與磷含量成正比，通過分光光度計(jì)在660nm 處檢測(cè)吸光度，通過檢查標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得磷含量，如果待測(cè)樣品中有無機(jī)磷，應(yīng)予以扣除，否則結(jié)果偏高。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、蒸餾水、濃硫酸

2、離心管或試管

3、容量瓶

4、凱氏燒瓶

5、水浴鍋

6、比色杯、分光光度計(jì)

操作步驟(僅供參考)：

1、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取適量的磷標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)，按磷標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)：蒸餾水=1：49 的比例

稀釋標(biāo)準(zhǔn)品至 20μg/ml。取干凈離心管或試管，按下表進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品濃度的依次稀釋，獲得不同濃度的多個(gè)磷標(biāo)準(zhǔn)。

 2、制備待測(cè)樣液：取樣品(如核酸粗提物)0.05g，加入少量蒸餾水溶解（如果難以溶解，可滴加樣品處理液至溶液 pH=7.0），準(zhǔn)確定容至 25ml(此溶液樣品含量 2mg/ml)，即為待測(cè)樣液。

3、制備總磷測(cè)定液：取上述待測(cè)樣液(2mg/ml)1ml，置于 50ml 凱氏燒瓶，加入 1ml 濃硫酸和 1 粒玻璃珠，凱氏燒瓶內(nèi)插入一個(gè)小漏斗，放在通風(fēng)櫥內(nèi)加熱至溶液呈黃色時(shí)取出，稍冷卻后加入 2～3 滴 H₂O₂，繼續(xù)消化至透明，表示消化完成。冷卻，轉(zhuǎn)移消化液至 100ml 容量瓶中，用少量蒸餾水洗滌凱氏燒瓶 2 次，洗滌液一并倒入容量瓶，加蒸餾水定容至 100ml，混勻后待用，即為總磷測(cè)定液。

4、無機(jī)磷測(cè)定液(選做)：取上述待測(cè)樣液(2mg/ml)1ml，置于 100ml 容量瓶中，加蒸餾水定容至 100ml，混勻后待用，即為無機(jī)磷測(cè)定液。

5、磷加樣：按下表進(jìn)行操作，依次加入下列溶液，如果樣品中有無機(jī)磷，應(yīng)同時(shí)檢測(cè)無機(jī)    磷，并將無機(jī)磷扣除。

 6、磷測(cè)定：45℃孵育 10min，冷卻后以分光光度計(jì)測(cè)定 660nm 處標(biāo)準(zhǔn)管、無機(jī)磷測(cè)定管、總磷測(cè)定管的吸光度(分別記為A_{標(biāo)準(zhǔn)}、A_{無機(jī)磷}、A_總磷)。

計(jì)算： 以磷含量(μg)(0~8 號(hào))為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。以 A_{有機(jī)磷}=A 總磷－A_{無機(jī)磷}之差值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線查的有機(jī)磷的質(zhì)量(μg)，再根據(jù)測(cè)定時(shí)取樣 ml 數(shù)，求得有機(jī)磷的質(zhì)量濃度(μg/ml)。

按下列公式計(jì)算樣品中核酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)：

核酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)=CV×11/m×100%

式中：C=有機(jī)磷的質(zhì)量濃度(μg/ml)

 V=樣品的總體積(ml)

11=1μg 磷相當(dāng)于 11μg 核酸

 m=樣品質(zhì)量(μg)

注意事項(xiàng)：

1、 待測(cè)樣品如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于 2~8℃保存，3 天內(nèi)穩(wěn)定。

2、 如果樣品濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

3、 消化時(shí)間應(yīng)視樣品不同而不同，如果是 RNA 樣品，一般在 800W 電爐上消化 45min。

有效期： 6 個(gè)月有效。常溫運(yùn)輸，4℃保存。