關鍵詞:MTT檢測|實驗技術服務
簡介：世界*品牌MTT檢測|實驗技術服務原裝，質量保證,*。
MTT檢測|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時，我們也會提供相應的原始數據和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面，我們所有的實驗數據真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程：
MTT分析法以活細胞代謝物還原劑3-(4，5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3，5-di- phenytetrazoliumromide， MTT噻唑藍為基礎。MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，可作用于活細胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下tetrazolium環(huán)開裂，生成藍色的formazan結晶，formazan結晶的生成量僅與活細胞數目成正比(死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原)。還原生成的formazan結晶可在含50%的N，N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數目。也可以用DMSO來溶解。
1、接種細胞
用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul。
2、培養(yǎng)細胞
同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3-5天(可根據試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間)。
3、呈色
培養(yǎng)3-5天后，每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul.繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內培養(yǎng)上清液，對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。
4、比色
選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。
二、注意事項
1、選擇適當得細胞接種濃度。
2、避免血清干擾：一般選小于10%的胎牛血清的培養(yǎng)液進行試驗。在呈色后盡量吸盡孔內殘余培養(yǎng)液。
3、設空白對照：與試驗平行不加細胞只加培養(yǎng)液的空白對照。其他試驗步驟保持一致，zui后比色以空白調零。
MTT實驗吸光度zui后要在0-0.7之間，超出這個范圍就不是直線關系，
IC50是半抑制率，意思是抑制率50%的時候藥物的濃度。把藥品稀釋成不同的濃度，然后計算各自的抑制率，以藥品的濃度為橫坐標，抑制率為縱坐標作圖，然后得到50%抑制率時候的藥品濃度，就是IC50。要點：藥品2倍稀釋，多做梯度，做點線圖即可!