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關(guān)鍵詞:DNA合成|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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DNA合成|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
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測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
DNA復(fù)制的一般過(guò)程:
DNA雙螺旋是由兩條方向相反的單鏈組成,復(fù)制開(kāi)始時(shí),雙鏈打開(kāi),形成一個(gè)復(fù)制叉(replicative fork,從打開(kāi)的起點(diǎn)向一個(gè)方向形成)或一個(gè)復(fù)制泡(replicative bubble,從打開(kāi)的起點(diǎn)向兩個(gè)方向形成。)兩條單鏈分別做模板。各自合成一條新的DNA鏈。由于DNA一條鏈的走向是5′→3′方向,另一條鏈的走向是3′→5′方向,但生物體內(nèi)DNA聚合酶只能催化DNA從5′→3′的方向合成。那么,兩條方向不同的鏈怎樣才能做模板呢?這個(gè)問(wèn)題由日本學(xué)者崗崎解決。
原來(lái),在以3′→5′方向的母鏈為模板時(shí),復(fù)制合成出一條5′→3′方向的前導(dǎo)鏈(leadingstrand),前導(dǎo)鏈的前進(jìn)方向與復(fù)制叉打開(kāi)方向是一致的,因此前導(dǎo)鏈的合成是連續(xù)進(jìn)行的,而另一條母鏈DNA是5′→3′方向,它作為模板時(shí),復(fù)制合成許多條5′→3′方向的短鏈,叫做隨從鏈(lagging strand),隨從鏈的前進(jìn)方向是與復(fù)制叉的打開(kāi)方向相反的。隨從鏈只能先以片段的形式合成,這些片段就叫做崗崎片段(Okazaki fragments),原核生物崗崎片段含有1000-2000核苷酸,真核生物一般100?00核苷酸。zui后再將多個(gè)崗崎片段連接成一條完整的鏈。由于前導(dǎo)鏈的合成是連續(xù)進(jìn)行的,而隨從鏈的合成是不連續(xù)進(jìn)行的,所以從總體上看DNA的復(fù)制是半不連續(xù)復(fù)制。
1、DNA復(fù)制機(jī)理--半保留復(fù)制
半保留復(fù)制(semiconservative replication)是DNA生物合成的一個(gè)重要特征。是指DNA合成(復(fù)制)時(shí),雙鏈解開(kāi),分別作為模板(template)指導(dǎo)DNA的合成,合成的子代新生雙鏈DNA中,總有一條來(lái)自親代DNA......
2、DNA復(fù)制的酶類(lèi)
參與DNA復(fù)制的主要物質(zhì)有:底物,即dATP,dGTP,dCTP 和 dTTP,總稱(chēng)為dNTP; DNA聚合酶(polymerase);模板(template),即雙鏈DNA解開(kāi)形成的單鏈;引物(primer),引導(dǎo)新生DNA的產(chǎn)生;其他......
3、DNA復(fù)制過(guò)程
DNA復(fù)制時(shí),首先需要解開(kāi)雙鏈,再生成引發(fā)體,在引發(fā)體的基礎(chǔ)上開(kāi)始合成新鏈。復(fù)制中的新鏈總是沿5′向3′端方向延伸,即底物dNTP去掉焦磷酸并以磷酸二酯鍵方式連接在延伸中的DNA鏈3′端的-OH上,一個(gè)接一個(gè)地疊加。由于DNA的雙鏈的走向......
4、DNA復(fù)制過(guò)程的調(diào)控
原核及其它低等生物與高等生物DNA復(fù)制的調(diào)控模式可能不同,同一生物的調(diào)控模式也可有不同的變化。對(duì)DNA復(fù)制的調(diào)節(jié)既有正調(diào)節(jié)也有負(fù)調(diào)節(jié)。
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