丙酮酸測(cè)定試劑盒的測(cè)定步驟:
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至520nm,蒸餾水調(diào)零。
2、取300μL 樣本+100μL 試劑一于1.5mL EP 管中,混勻,靜置2min,加入500μL 試劑二,混勻,于520nm波長(zhǎng)處測(cè)定管吸光值A。
丙酮酸的計(jì)算方法:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.0466x + 0.0675; x 為丙酮酸含量(µg/mL),y 為吸光值。
2、按照血清(漿)體積計(jì)算
丙酮酸含量(μg/mL)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V3×V1÷V2)=214.6×(A-0.0675)
3、按照蛋白濃度計(jì)算
丙酮酸含量(μg/mg prot)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr
4、按照樣品質(zhì)量計(jì)算
丙酮酸含量(µg/g 鮮重)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2)=21.46×(A-0.0675) ÷W
5、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
丙酮酸含量(μg/104 cell)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(500×V1÷V2)=0.043×(A-0.0675)
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.3mL;V2:加入提取液體積,1 mL;V3:加入血清(漿)體積,0.1 mL;
Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。
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