高效液相色譜一般都是由輸液系統(tǒng)(泵) 、進(jìn)樣系統(tǒng) 、 分離系統(tǒng)(柱)、檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。各部分簡(jiǎn)述如下：
1、輸液系統(tǒng)(高壓泵)及其重要性
高壓泵是關(guān)鍵部件之一，按原理分為兩種類型：一類是恒流泵，一類是恒壓泵。恒流泵，無論色譜柱的阻力如何變化、無論外界有何影響，它輸出的流動(dòng)相的流速可以基本保持不變，這正好是HPLC系統(tǒng)工作的基本要求;而恒壓泵輸出的基本上是恒定不變的壓力，在正常情況下，由于HPLC系統(tǒng)的阻力不會(huì)變化，所以恒壓也可以達(dá)到恒流的效果。但是由于色譜柱、溫度等可能會(huì)有變化，所以可能導(dǎo)致流量變化，這是HPLC使用者不希望看到的結(jié)果。所以一般來講，恒流泵比恒壓泵好(橫流泵的使用多于恒壓泵)。目前我國(guó)有近20家企業(yè)在生產(chǎn)各種不同類型的HPLC，但是基本上都是采用恒流泵;例如：北京普析公司的L600系列、北京東西電子的LC-5510、 北京瑞利公司的SY-8100 、大連依利特公司的5100、上海伍豐公司的LC100、上海儀電公司的LC210、浙江福立公司的LC1190等等儀器都是采用的高壓恒流泵輸液。
高壓泵的質(zhì)量直接影響整個(gè)HPLC的質(zhì)量，是用戶關(guān)注的核心部件之一。高效液相色譜高壓泵的重要性及使用者對(duì)高壓泵的具體要求如下：
(1)耐高壓
耐高壓是HPLC系統(tǒng)對(duì)高壓泵的基本要求之一，一般來講，平均粒徑為4µm左右的填料、內(nèi)徑為5mm左右的色譜柱，當(dāng)流動(dòng)相流速為1-3mL/min時(shí)，要求輸液泵的最高工作壓力達(dá)到34.47-41.36Mpa(5000-6000psi);目前國(guó)際上商品HPLC泵的最高工作壓力一般為41.36Mpa (5000psi)左右。但隨著填料粒徑的不斷減小，粒徑為1-2.5µm范圍的小粒徑無孔色譜填料的應(yīng)用推廣，流動(dòng)相在色譜柱中的阻力會(huì)更大，所以，2004年國(guó)際上出現(xiàn)了超高壓液相色譜，要求輸液泵能夠耐更高的壓力。目前市場(chǎng)上已有達(dá)到68.94Mpa(10000psi)的高壓恒流泵(如：Altex 100A)。
(2)穩(wěn)定性好、脈動(dòng)小
輸液高壓泵的穩(wěn)定性和脈動(dòng)大小會(huì)直接影響HPLC系統(tǒng)的穩(wěn)定性(漂移和重復(fù)性)、影響系統(tǒng)的噪聲、降低靈敏度，特別是HPLC系統(tǒng)采用電化學(xué)檢測(cè)器和示差等檢測(cè)器，或進(jìn)行梯度分離時(shí)更加重要，因此目前國(guó)際上很多高壓泵的壓力脈動(dòng)都可以控制在1%以內(nèi)。
(3) 流量連續(xù)可調(diào)、流量范圍寬
目前國(guó)際上HPLC的高壓泵，大多數(shù)流動(dòng)范圍可以達(dá)到0.001-10.0mL/min(制備色譜的流量更大，有時(shí)要求達(dá)到數(shù)千mL/min)，可以同時(shí)滿足各種不同內(nèi)徑的色譜柱的分析工作要求。
(4) 流量重復(fù)性好
很多HPLC的泵的流量重復(fù)性可以達(dá)到0.07%(RSD)。但是重復(fù)性與測(cè)試方法有關(guān)，目前國(guó)際上一般采用兩種方法測(cè)試：一是重量法，收取泵的單位時(shí)間里的流出液，在天平上直接稱其重量，判斷重復(fù)性;二是保留時(shí)間法，根據(jù)保留時(shí)間的長(zhǎng)短，來判斷流量的重復(fù)性。在HPLC的分析工作中，其定性分析一般是根據(jù)保留時(shí)間。高壓泵的重復(fù)性(RSD)是極其重要的指標(biāo)之一，也是影響HPLC整機(jī)系統(tǒng)重復(fù)性的一項(xiàng)非常重要的性能技術(shù)指標(biāo)。
(5)死體積小
高壓泵的死體積會(huì)影響HPLC的分析精密度和準(zhǔn)確度，特別是影響梯度洗脫的效果，一般總是希望死體積越小越好。因?yàn)楦邏罕玫乃荔w積小，有利于溶劑的快速置換，并且有利于把系統(tǒng)的氣泡及時(shí)排出。
(6) 流量準(zhǔn)確度高
HPLC高壓泵的流量準(zhǔn)確度很重要，直接影響分析測(cè)試數(shù)據(jù)的重復(fù)性(可靠性)。目前國(guó)內(nèi)外HPLC的泵流量重復(fù)性一般在1%左右(與測(cè)試方法有關(guān))，可達(dá)到0.06%(采用保留時(shí)間法;如美國(guó)waters、日本島津、中國(guó)普析通用的高壓泵等就是如此)。
(7) 具有梯度洗脫功能
目前國(guó)際上的HPLC儀器，一般都具有梯度洗脫功能;因?yàn)?，往往等度洗脫不能解決的分析工作，如果采用梯度洗脫的方法，就可能很好的解決問題。因此，HPLC的使用者，往往需要儀器的高壓泵具有流速程序和梯度洗脫程序。
除上述幾點(diǎn)外，對(duì)HPLC的高壓泵的要求還有耐用、流速可控程、具有壓力檢測(cè)保護(hù)功能、維修方便等。
