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液氮罐之種子保存
液氮罐是超低溫保存方法之一，能夠達(dá)到零下196度的溫度
作者：液氮罐
2018-02-22 14:48:18
分類(lèi)： 政策法規(guī)
標(biāo)簽： 液氮罐
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種質(zhì)資源庫(kù)的液氮罐低溫建設(shè)方法探討
種子資源整體建設(shè)長(zhǎng)期保存，是減少外部環(huán)境破壞利用人工條件極大保存種質(zhì)資源的方法。，主要 包括種子低溫保存，超低溫保存等*新前沿保存方法。利用液氮罐的種質(zhì)資源保存是當(dāng)今**的種質(zhì)資源保存方法。也是*科學(xué)的保存方法。
液氮罐是超低溫保存方法之一，能夠達(dá)到零下196度的溫度，是長(zhǎng)期保存種子的方法。這種方法是將種質(zhì)材料(包括種子、組織體等)保存在-196℃的液氮環(huán)境中，讓種子生命休眠并保存生命活力在極低的溫度下，在液氮(-196℃)溫度下，任何的細(xì)胞生長(zhǎng)都能夠長(zhǎng)期的休眠停止，這也是認(rèn)為目前為止的作為植物種子休眠保存的*好辦法。節(jié)省資源節(jié)省人力物力。
這是一種整套技術(shù)，能夠把物種溫度變溫到零下196度下并長(zhǎng)久保存長(zhǎng)久休眠，使其能夠保存其生命活力，待使用時(shí)能夠恢復(fù)其細(xì)胞生命力的技術(shù)方法。
一般來(lái)說(shuō)，它包括以下6個(gè)步驟:
(1)前培養(yǎng):對(duì)培養(yǎng)體短期的生長(zhǎng)鍛煉處理，使其提高耐液氮保存的能力。
(2)防凍:培養(yǎng)體放入防凍液中，使其細(xì)胞降低冰點(diǎn)，減少因形成冰晶可能造成的損傷。
(3)變溫冷凍:按照不同變溫模式降溫冷凍，降溫速度依不同種質(zhì)材料采用特定的速度。
(4)超低溫保存:將冷凍材料保存到有效低溫環(huán)境中，以防止冰的游移或解體。
(5)解凍：一般認(rèn)為快速解凍更好。從液氮環(huán)境中取出封裝好的材料，與其容器一同放入+40℃的無(wú)菌水浴中，直到解凍后才回到室溫下，未封裝的材料放到20～30℃的液體培養(yǎng)基中解凍。
(6)生命力測(cè)定:如用TTC染色法等。
種子材料的超低溫保存，傳統(tǒng)的技術(shù)有干凍法、預(yù)凍法和兩步法，上世紀(jì)80年代末和90個(gè)代初玻璃化法和包埋脫水法開(kāi)始應(yīng)用于植物材料的超低溫保存。
干凍法:利用無(wú)菌空氣流、干燥硅膠或飽和溶液表面的氣相等對(duì)種質(zhì)材料進(jìn)行脫水處理，然后快速將其投入液氮貯存。
預(yù)凍法:將種質(zhì)材料在添加保護(hù)劑(如蔗糖、二甲亞砜、甘油等)后置于低溫冰箱或液氮蒸汽箱(-10～-70℃)中冰凍若干小時(shí)后投入液氮貯存。
兩步法:種質(zhì)材料在添加保護(hù)劑后，用程序降溫儀以某個(gè)速率(每分鐘0.1～0.5℃)降溫至轉(zhuǎn)移溫度(-40～-70℃)，然后投入液氮中貯存，兩步法較預(yù)凍法更為嚴(yán)格。
玻璃化法:種質(zhì)材料用高濃度的復(fù)合冰凍保護(hù)劑處理后，快速投入液氮貯存，細(xì)胞直接用*濃度的保護(hù)劑脫水，在快速降溫時(shí)胞內(nèi)胞外都進(jìn)入玻璃化態(tài)，而不形成冰晶，從而避免了細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞。包埋脫水法:莖尖、分生組織和體細(xì)胞胚等種質(zhì)材料用褐藻酸鈣包埋后，階段先在含高濃度蔗糖的培養(yǎng)基中脫水，第二步使用無(wú)菌空氣為其脫水，放入液氮罐長(zhǎng)期保存