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無(wú)血清培養(yǎng)
閱讀:1493發(fā)布時(shí)間:2016-1-29
無(wú)血清培養(yǎng)基
(serum
free
medium,SFM)
:
是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞
在體外較長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)繁殖的合成培養(yǎng)基。
但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白
組分。
雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的*培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)
的要求,
但對(duì)有些實(shí)驗(yàn)卻不適合,
如觀察一種生長(zhǎng)因子對(duì)某種細(xì)胞的作用,
這時(shí)
需要排除其他生長(zhǎng)因子的干擾作用。
而血清中可能含有各種生長(zhǎng)因子;
又如需要
測(cè)定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中分泌某種物質(zhì)
(抗體、
生長(zhǎng)因子)
的能力;
或者要大
規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞,以獲得它們的分泌產(chǎn)物。
無(wú)血清培養(yǎng)基的基本配方
:
基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。
用
于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),多數(shù)呈貼壁生長(zhǎng)或兼性貼壁生長(zhǎng);
而當(dāng)其在無(wú)血清、
無(wú)蛋白培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),
由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子
如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細(xì)胞往往以懸浮形式生長(zhǎng)。
添加組分
:
1.
促貼壁物質(zhì):許多細(xì)胞必須貼壁才能生長(zhǎng),這種情況下無(wú)血清培養(yǎng)基中一定
要添加促貼壁和擴(kuò)展因子,
一般為細(xì)胞外基質(zhì),
如纖連蛋白、
層粘連蛋白等。
它
們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子,
對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分
化,
起著重要作用。
纖連蛋白主要促進(jìn)來(lái)自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化,
這些細(xì)胞
包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、
CHO
細(xì)
胞、成肌細(xì)胞等。
2.
促生長(zhǎng)因子及激素:針對(duì)不同細(xì)胞添加不同的生長(zhǎng)因子。激素也是刺激細(xì)胞
生長(zhǎng)、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),有些激素是許多細(xì)胞*的,如胰島素。
3.
酶抑制劑:培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,需要用胰酶消化傳代,在基中
*須含酶抑制劑,
以終止酶的消化作用,
達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。
zui常用的
是大豆胰酶;抑制劑。
4.
結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白:常見(jiàn)如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添
加比較大,
可增加培養(yǎng)基的粘度,
保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。
許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無(wú)
血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。
5.
微量元素:硒是zui常見(jiàn)的。
基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的*培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求,但對(duì)有些實(shí)驗(yàn)卻不適合,如觀察一種生長(zhǎng)因子對(duì)某種細(xì)胞的作用,這時(shí)需要排除其他生長(zhǎng)因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長(zhǎng)因子;又如需要測(cè)定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中分泌某種物質(zhì)(抗體、生長(zhǎng)因子)的能力;或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞,以獲得它們的分泌產(chǎn)物。 基的基本配方:基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。 用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),多數(shù)呈貼壁生長(zhǎng)或兼性貼壁生長(zhǎng);而當(dāng)其在無(wú)血清、無(wú)蛋白培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細(xì)胞往往以懸浮形式生長(zhǎng)。添加組分: 1. 促貼壁物質(zhì):許多細(xì)胞必須貼壁才能生長(zhǎng),這種情況下基中一定要添加促貼壁和擴(kuò)展因子,一般為細(xì)胞外基質(zhì),如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子,對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來(lái)自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化,這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。 2. 促生長(zhǎng)因子及激素:針對(duì)不同細(xì)胞添加不同的生長(zhǎng)因子。激素也是刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),有些激素是許多細(xì)胞*的,如胰島素。 3. 酶抑制劑:培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,需要用胰酶消化傳代,在基中*須含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。zui常用的是大豆胰酶;抑制劑。 4. 結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白:常見(jiàn)如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比較大,可增加培養(yǎng)基的粘度,保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的基都含有牛血清白蛋白。 5. 微量元素:硒是zui常見(jiàn)的。
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