 | 重慶市華雅干細胞技術有限公司 |
12
15021010459
顏先生 （經(jīng)理）
- 電話：
- 400-021-2200
- 手機：
- 15021010459
- 傳真：
- 023-63419626
- 聯(lián)系我時，
- 告知來自化工儀器網(wǎng)
- 個性化：
- www.hystemcell.cn
- 商鋪網(wǎng)址：
- http://www.syzwkj.com/st275923/
- 公司網(wǎng)站：
- https://www.ys-bio.cn/
細胞凍存操作步驟
閱讀：2826發(fā)布時間：2019-3-4
操作步驟
（一）細胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；
2. 取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來；
4. 離心1000rpm，5min；
5. 去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細胞的終密度為5×106/ml～1×107/ml；
6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
8. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。
（二） 細胞復蘇
1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混勻；
3. 離心， 1000rpm，5min；
4. 棄去上清液，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細胞，計數(shù)，調(diào)整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
5. 次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
重慶市華雅干細胞技術有限公司主營產(chǎn)品：Lonza支原體檢測試劑盒,Stemcell胚胎干細胞培養(yǎng)基,StemRD生長分化因子
化工儀器網(wǎng) 設計制作，未經(jīng)允許翻錄必究.Copyright(C) http://www.syzwkj.com, All rights reserved.
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關企業(yè)負責，化工儀器網(wǎng)對此不承擔任何保證責任。 溫馨提示：為規(guī)避購買風險，建議您在購買產(chǎn)品前務必確認供應商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。