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HY STEMCELL 人間充質干細胞培養(yǎng)基（無血清，臨床級）
閱讀：3487發(fā)布時間：2017-12-22
人間充質干細胞培養(yǎng)基已經發(fā)展到了第三代：
*代 培養(yǎng)基+牛血清
第二代 培養(yǎng)基+牛血清替代品：人血清、血小板裂解液和臍帶血清
第三代 無血清、無動物源、成分確定的培養(yǎng)基
第三代人間充質干細胞培養(yǎng)基不含牛血清或人血清之類的血清替代品，無動物源而且成分確定，免除了異種血清帶來的病原體污染風險，而且批次穩(wěn)定，適合干細胞治療的臨床研究。
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基
中文名：HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基
英文名：HY STEMCELL CCGmHuMTM Human MSCs Growth Medium
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基是成分確定、無血清、無異源物，無需鋪板膠的*培養(yǎng)基。適用臍帶或脂肪來源的人間充質干細胞的原代培養(yǎng)擴增。培養(yǎng)的hMSC可傳多代。
特點
Serum-free 無血清成分
Xeno-free 無動物源
Chemically-defined 化學成分明確
NO plate coating necessary 無須昂貴的鋪板蛋白
Perform better than FBS medium 生長分化優(yōu)于血清培養(yǎng)基
組份
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基包括【Basal Medium 基礎培養(yǎng)基】 和 【Supplement Medium 細胞因子添加物】兩部分?；A培養(yǎng)基中添加HEPES和L-谷氨酰胺。細胞因子添加物中含有多種細胞生長因子、粘附蛋白、轉鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。
產品 | 貨號 | 規(guī)格 | 儲存 |
CCGmHuM Human MSCs Medium | HX0201M | 套裝 |
|
CCGmHuM Human MSCs Basal Medium | HX0202M | 450mL | 2～8℃ |
CCGmHuM Human MSCs Supplement Medium 10X | HX0203M | 50mL | –20°C |
培養(yǎng)表現(xiàn)
使用HY StemCell CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)人臍帶間充質干細胞，傳到第7代，MSC形態(tài)功能維持良好。
應用
適用于原代培養(yǎng)臍帶或脂肪組織來源的人間充質干細胞。
培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基：*培養(yǎng)基
細胞系：臍帶或脂肪組織來源的人間充質干細胞
細胞類型：貼壁
儲存
基礎培養(yǎng)基保存在2～8℃。細胞因子添加物保存在–20°C。
使用注意
為保障活性，建議把【Supplement Medium 細胞因子添加物】一次解凍后分裝再凍存，不宜反復凍融。
訂購信息
品牌 | 貨號 | 產品描述 | 包裝 | 目錄價 |
HY StemCell | HX0201M | CCGmHuMTM Human MSCs Medium 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基 | 1 Kit | 3000元 |
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背景知識
2015年國家重新開放干細胞行業(yè)政策以來，衛(wèi)計委等已經發(fā)布了多個文件：
《國家重點研發(fā)計劃干細胞與轉化醫(yī)學重點專項實施方案（征求意見稿）》
目標：凝聚優(yōu)勢力量，重點針對干細胞發(fā)生，發(fā)育和形成功能細胞過程中的重要科學問題，深入開展干細胞、生物材料、組織工程、生物人工器官，以及干細胞與疾病發(fā)生等方面的基礎研究、應用基礎研究和轉化開發(fā)。整體提升我國干細胞及其轉化醫(yī)學領域的實力，加快科研成果的應用。
任務：1. 多能干細胞干性維持機制。2. 組織干細胞的獲得及功能。3. 干細胞定向分化及細胞轉分化機制。4. 干細胞的體內功能與作用機制。5. 基于干細胞的器官再造。6. 干細胞資源庫。7. 干細胞臨床前評估。8. 干細胞轉化與應用。
《干細胞制劑質量控制及臨床前研究指導原則》（試行）（征求意見稿）
提出了適用于各類可能應用到臨床的干細胞（除已有規(guī)定的造血干細胞移植外）在制備和臨床前研究階段的基本原則。每個具體干細胞制劑的制備和使用過程，必須有嚴格的標準操作程序并按其執(zhí)行，以確保干細胞制劑的質量可控性以及治療的安全性和有效性。
培養(yǎng)基部分摘錄：
培養(yǎng)基 干細胞制劑制備所用的培養(yǎng)基成分應有足夠的純度并符合無菌、無致病微生物及內毒素的質量標準,殘留的培養(yǎng)基對受者應無不良影響；在滿足干細胞正常生長的情況下，不影響干細胞的生物學活性，即干細胞的“干性”及分化能力。在干細胞制劑制備過程中，應盡量避免使用抗生素。
若使用商業(yè)來源培養(yǎng)基，應選擇有資質的生產商并由其提供培養(yǎng)基的組成成分資料及相關質量合格證明。必要時，應由專業(yè)檢定機構對每批培養(yǎng)基進行質量檢驗，并出具檢驗報告。
除特殊情況外，應盡可能避免在干細胞培養(yǎng)過程中使用人源或動物源性血清，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動物血清，應確保其無特定動物源性病毒污染。嚴禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來源的牛血清。
若培養(yǎng)基中含有人的血液成份，如白蛋白、轉鐵蛋白和各種細胞因子等，應明確其來源、批號、質量檢定合格報告，并盡量采用國家已批準的可臨床應用的產品。
《干細胞臨床研究管理辦法（試行）》
關于干細胞臨床研究的醫(yī)療機構的條件與責任、干細胞臨床研究的立項與備案、臨床研究流程及要求、臨床研究報告制度、專家委員會責任和監(jiān)督管理。
《*干細胞臨床研究機構名單》*30家單位
《第二批干細胞臨床研究備案機構》次批72家單位 2017年11月
《干細胞通用要求》
該要求圍繞干細胞制劑的安全性、有效性及穩(wěn)定性等關鍵問題，建立了干細胞的供者篩查、組織采集、細胞分離、培養(yǎng)、凍存、復蘇、運輸及檢測等的通用要求
可見，干細胞治療的臨床研究正在標準規(guī)范化。使用無血清培養(yǎng)基更加安全，監(jiān)管要求更少。
一 人間充質干細胞培養(yǎng)基的發(fā)展
人間充質干細胞的來源
從1970年發(fā)現(xiàn)以來，脂肪組織、胎盤、牙髓、滑膜、外周血、牙周韌帶、子宮內膜、臍帶和臍帶血中都有研究發(fā)現(xiàn)間充質干細胞[1]，不過應用比較多的來源還是骨髓、脂肪和臍帶組織中的間充質干細胞[2]。目前，異體間充質干細胞密度zui高來源是臍帶，每毫升zui高能獲得470萬個MSC，而自體間充質干細胞密度zui高來源是脂肪組織，每毫升zui高能獲得155萬個MSC[3]。HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基就是適用臍帶和脂肪組織來源的hMSC培養(yǎng)。
圖源網(wǎng)絡：臍帶和華通氏膠
人間充質干細胞的培養(yǎng)發(fā)展[4]
人間充質干細胞的下游應用是組織修復等疾病治療，因此它的培養(yǎng)要滿足醫(yī)用的高標準。隨著臨床應用的成熟，間充質干細胞培養(yǎng)基也經歷了從有血清到無血清培養(yǎng)基的轉變。
有血清培養(yǎng)基一開始使用的是胎牛血清，胎牛血清是天然產品，批次間差異大，影響實驗穩(wěn)定性，尤其還是異源物，會有病原體污染風險和免疫影響，不利治療安全，需要額外監(jiān)管。于是越來越多的血清培養(yǎng)基選擇了自體或同源異體的人源血清作為培養(yǎng)基添加物，包括人血清、血小板裂解液和臍帶血清。
低血清或人源血清仍然不夠穩(wěn)定，也不能*免除病原體的污染風險，隨之興起的是成分確定的無血清培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基用重組人蛋白代替血清中的天然蛋白，以此來消滅異種蛋白輸入人體可能會引起的免疫抗體反應。比如血清中zui基礎的白蛋白、轉鐵蛋白和胰島素，無血清培養(yǎng)基都改用重組人轉鐵蛋白和重組人胰島素代替，而不是提取天然產物。無血清培養(yǎng)基發(fā)展中，確定了多種生長因子是人間充質干細胞擴增必須添加的。HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基細胞因子添加物中含有多種細胞生長因子、粘附蛋白、轉鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。
二 人類間充質干細胞的分離與原代培養(yǎng)方法[5]
新生兒臍帶間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)
新生兒臍帶組織剝取華通氏膠，以組織塊培養(yǎng)法或酶消化法分離新生兒間充質干細胞，
貼壁法做原代培養(yǎng)。
新生兒臍帶血來源間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)
新生兒臍帶血樣本，與磷酸緩沖液 1:1 稀釋后，以密度梯度離心法分離單個核細胞，貼壁法培養(yǎng)。定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長的成纖維細胞樣的細胞達到匯合。
新生兒胎盤間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)
剝取胎盤羊膜、絨毛膜或絨毛組織，以酶消化法分離胎盤間充質干細胞，貼壁法做原代培養(yǎng)。
人類脂肪間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)
成人脂肪組織，以酶消化法分離脂肪間充質干細胞，貼壁法做原代培養(yǎng)。
人類牙髓間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)
牙齒樣本，完整剝離牙髓，以酶消化法分離牙髓間充質干細胞，貼壁法做原代培養(yǎng)。
人類骨髓間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)
人骨髓液樣本，以密度梯度離心法分離骨髓間充質干細胞，貼壁法作原代培養(yǎng)。
人類宮內膜間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)
宮內膜組織樣本以酶消化法分離子宮內膜干細胞，并做原代培養(yǎng)?；?/span>
人羊水來源間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)
人羊水樣本，100 目濾器過濾后離心，棄上清。以培養(yǎng)液重懸細胞沉淀，貼壁法培養(yǎng)。
定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長的成纖維細胞樣的細胞達到匯合。
人類母乳來源間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)
人類母乳樣本，100 目濾器過濾后離心，棄上清。以培養(yǎng)液重懸細胞沉淀，貼壁法培養(yǎng)。定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長的成纖維細胞樣的細胞達到匯合。
人類滑膜來源間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)
人類滑膜組織樣本，以酶消化法分離滑膜間充質干細胞。離心洗滌后，貼壁法培養(yǎng)。定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長的成纖維細胞樣的細胞達到匯合。
參考文獻
1 FENG-JUAN LV et al.Concise Review: The Surface Markers and Identity of Human Mesenchymal Stem Cells.2014.
2 Marcin Majka et al.Concise Review: Mesenchymal Stem Cells in Cardiovascular Regeneration: Emerging Research Directions and Clinical Applications.2017.
3 C. ThomasVangsness Jr. et al.Umbilical Cord Tissue Offers the Greatest Number of Harvestable Mesenchymal Stem Cells for Research and Clinical Application: A Literature Review of Different Harvest Sites.2015.
4 Dolly Mushahary et al.Isolation, C*tion, and Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells.2017.
5 SZDB/Z 126 2015《人類間充質干細胞庫建設與管理規(guī)范》
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