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導(dǎo)語

杜氏肌營養(yǎng)不良（DMD）是由DMD基因突變引起dystrophin蛋白缺陷，從而影響細(xì)胞骨架肌動蛋白與細(xì)胞外基相連。嬰幼兒時期的DMD處于癥狀前期，骨骼肌尚處于肌肉代償期，所以臨床表現(xiàn)比較輕微，難以發(fā)現(xiàn)。有研究統(tǒng)計，從關(guān)注到診斷為DMD，平均需要1.6~2年，此時肌肉功能已經(jīng)下降。因此，盡早對DMD進(jìn)行早期篩查和排除診斷十分重要。

隨著空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)的發(fā)展，ACD作為最早推出新一代RNA原位雜交技術(shù)RNAscope的企業(yè)，其單細(xì)胞、單分子水平RNA檢測技術(shù)位于世界前列，可提供RNA在組織、細(xì)胞的空間表達(dá)信息，是推進(jìn)基礎(chǔ)研究、提高診斷試劑精準(zhǔn)性的利器。

最新研究

2023年9月，來自英國倫敦大學(xué)和意大利費拉拉大學(xué)的研究團(tuán)隊在Nature子刊Scientific Reports發(fā)表了題為“mRNA in situ hybridization exhibits unbalanced nuclear / cytoplasmic dystrophin transcript repartition in Duchenne myogenic cells and skeletal muscle biopsies" 的文章，應(yīng)用了RNAscope原位雜交技術(shù)，研究了杜氏肌營養(yǎng)不良 (DMD) 患者的成肌細(xì)胞、肌管和骨骼肌活檢中的DMD mRNA量并定義了其區(qū)室化，深入了解杜氏肌營養(yǎng)不良 (DMD) 基因轉(zhuǎn)錄動態(tài)和空間定位。

研究團(tuán)隊用RNAscope™ 2.5 HD Assay - RED試劑盒和2個探針（針對肌營養(yǎng)不良蛋白轉(zhuǎn)錄物的外顯子37-42的37-42 ZZ 探針和針對肌營養(yǎng)不良蛋白轉(zhuǎn)錄物的外顯子63-75的63-75ZZ 探針）對 DMD 永生化成肌細(xì)胞、DMD 肌管和 DMD 骨骼肌活檢進(jìn)行了測定。

結(jié)果顯示，37-42探針在永生化成肌細(xì)胞（圖1）、肌管（圖2）和骨骼肌活檢（圖3）產(chǎn)生強烈的點信號（紅色箭頭），主要位于細(xì)胞核和核周膜，而小點主要位于細(xì)胞質(zhì)；63-75 探針在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均顯示出較小的點。另外，永生化細(xì)胞顯示肌營養(yǎng)不良蛋白轉(zhuǎn)錄信號顯著減少（圖4）。

通過定量分析，在對照和DMD肌原細(xì)胞中，研究發(fā)現(xiàn)約40%的核DMD mRNA定位于核仁中，突變型DMD mRNA 數(shù)量在患者的生肌細(xì)胞和肌肉活檢中顯著減少。此外，突變型DMD mRNA區(qū)室化由于其定位向細(xì)胞核的轉(zhuǎn)變而在空間上不平衡。這種異常的轉(zhuǎn)錄物重新分配導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)中肌營養(yǎng)不良蛋白信使的豐度和可用性較差。這一新發(fā)現(xiàn)也對 RNA 靶向療法產(chǎn)生了重要影響。

關(guān)于RNAscope®

RNAscope®是一種可在組織或細(xì)胞原位檢測單一分子RNA的原位雜交技術(shù)。它是基于ACD的雙zz型探針設(shè)計，寡核苷酸互補配對的信號放大系統(tǒng)，通過酶催化底物，可在顯微鏡下看到熒光或可見光的信號。不僅實現(xiàn)了單一分子RNA的原位檢測，還可實現(xiàn)在一張組織切片上最多標(biāo)記4個不同的RNA分子。根據(jù)試劑盒的不同，分為熒光試劑盒和可見光試劑盒。該技術(shù)可以應(yīng)用到多種類型的樣本中，如石蠟包埋樣本，冰凍樣本，貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞樣本等。