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詳細(xì)介紹
慢病毒包裝服務(wù)
慢病毒簡(jiǎn)介
慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)和特性：整合入宿主細(xì)胞基因組，長(zhǎng)期表達(dá)，可用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備；但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組份和特性：比逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度，不僅可以感染分裂期細(xì)胞，更重要的，還能感染非分裂期的細(xì)胞。利用慢病毒載體，可以研究啟動(dòng)子的調(diào)控、過(guò)表達(dá)特定基因或沉默特定基因。
慢病毒包裝技術(shù)特點(diǎn)
病毒表達(dá)系統(tǒng) | 腺病毒表達(dá)系統(tǒng) | 慢病毒表達(dá)系統(tǒng) |
病毒基因組 | 雙鏈DNA病毒 | RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒 |
自主復(fù)制 | 不能 | 不能 |
是否整合 | 病毒基因組游離于宿主基因組外，瞬時(shí)表達(dá)外源基因 | 病毒基因組整合于宿主基因組，長(zhǎng)時(shí)間、穩(wěn)定表達(dá)外源基因 |
感染細(xì)胞類型 | 感染絕大多數(shù)細(xì)胞，包括分裂期、非分裂期細(xì)胞。 | 感染絕大多數(shù)細(xì)胞，包括分裂期、非分裂期細(xì)胞。 |
表達(dá)豐度 | 高水平表達(dá) | 中水平表達(dá) |
表達(dá)時(shí)間 | 快（1-2 天） | 慢（2-4 天） |
滴度 | 滴度可達(dá)10E12pfu/mL | 滴度可達(dá)10E9－10E10TU/mL |
克隆容量 | 可插入高達(dá)8kb的外源片段，滴度隨插入片段長(zhǎng)度增加而降低 | 可插入不超過(guò)8kb的外源片段，滴度隨插入片段長(zhǎng)度增加而降低 |
免疫原性 | 高免疫原性 | 低免疫原性 |
RNAi | 病毒進(jìn)入細(xì)胞往往引起細(xì)胞內(nèi)干擾素反應(yīng)，一般情況下不適合做RNAi實(shí)驗(yàn) | 適合，是RNAi實(shí)驗(yàn)的優(yōu)選工具 |
基因過(guò)表達(dá) | 包裝容量較大，可以滿足較大基因的包裝，是過(guò)表達(dá)基因的優(yōu)選工具 | 包裝容量有限，過(guò)表達(dá)的基因過(guò)大時(shí)，病毒滴度受到影響 |
過(guò)表達(dá)microRNA | 適合 | 適合，是過(guò)表達(dá)microRNA實(shí)驗(yàn)的優(yōu)選工具 |
下調(diào)microRNA | 有報(bào)道但不成熟 | 有報(bào)道但不成熟 |
是否可以自行擴(kuò)增 | 可以 | 需要特殊包裝系統(tǒng)和包裝環(huán)境 |
A. 慢病毒載體的構(gòu)建：
根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建慢病毒載體，如用于RNAi的慢病毒載體、用于基因過(guò)表達(dá)的慢病毒載體、用于啟動(dòng)子活性研究的慢病毒載體等；
B. 慢病毒包裝過(guò)程：
將重組病毒質(zhì)粒及其輔助包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至包裝細(xì)胞中，收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，對(duì)其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在293T細(xì)胞中測(cè)定并標(biāo)定病毒滴度。
C. 慢病毒包裝結(jié)果：
滴定濃度：1×107～1×108TU/ml
zui終體積：1 ml純化后的病毒液（儲(chǔ)存于PBS）
儲(chǔ)存：批量?jī)?chǔ)存的*條件為-80°C。
慢病毒包裝用途：
慢病毒載體包裝之后成為假病毒顆粒后，可用于:
· 感染原代細(xì)胞；
· 制備穩(wěn)定表達(dá)/沉默特定基因的單克隆細(xì)胞株；
· in vivo的基因操作；
· 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，特別是轉(zhuǎn)基因大鼠的制備。
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