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如何8小時內(nèi)在單塊孔板中篩選上百萬個B細(xì)胞?

閱讀:240      發(fā)布時間:2024-3-21
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抗體是理想的治療性生物大分子,不但能與各種靶點(diǎn)結(jié)合,且具有高親和力和特異性。隨著雜交瘤和噬菌體展示技術(shù)的創(chuàng)新,藥物研發(fā)人員能夠利用抗體的天然多樣性,廣泛使用單克隆抗體(mAbs)治療癌癥、慢性炎癥和傳染病。

作為抗體開發(fā)上游的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié),單B 細(xì)胞篩選技術(shù)已經(jīng)有了顯著發(fā)展,并成為獲取抗原特異性mAb 序列的主要來源。然而,這一技術(shù)仍然面臨諸多挑戰(zhàn),如:開發(fā)效率低、成本高昂等問題。

只需一臺Incucyte®實(shí)時活細(xì)胞分析系統(tǒng),結(jié)合CellTraxx 軟件便可自動對細(xì)胞的運(yùn)動和形態(tài)進(jìn)行高通量、實(shí)時的無標(biāo)記追蹤,輕松為每一個細(xì)胞都裝上“GPS”,讓您的研究跳脫傳統(tǒng)束縛,邁入高效率的新時代。

 

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高效可靠的新型單細(xì)胞分離技術(shù)

 

基于納米孔陣列和圖像驗(yàn)證的高通量克隆篩選(HT-NIC)技術(shù)基于CellCelector納米孔板,每個大孔底部都有多達(dá)數(shù)十萬個納米孔,能夠有效地對成千上萬個單細(xì)胞進(jìn)行分離,同時確保細(xì)胞被相同的培養(yǎng)基覆蓋,因此可以共享生長因子,在共培養(yǎng)環(huán)境下更容易生長至克隆。

 

 

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全面加速的B細(xì)胞篩選流程

 

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靈活經(jīng)濟(jì)的B細(xì)胞篩選方案

CellCelector支持明場、相差以及藍(lán)色、綠色、紅色、遠(yuǎn)紅外和近紅外熒光通道成像以進(jìn)行分泌物多重分析。對納米孔板中的單個細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞分泌分析,能夠快速識別理想的分泌細(xì)胞。CellCelector B細(xì)胞工作流程支持多種細(xì)胞分析策略,包括使用抗原包被孔板、加入微球或抗原表達(dá)報告細(xì)胞的分析策略。

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圖1. CellCelector B細(xì)胞工作流程和基于納米孔的分泌測定示意圖

CellCelector B細(xì)胞篩選可使用H100型(六邊形)納米孔板,每個大孔包含60,000個納米孔,且具有無細(xì)胞毒性和低黏附性的特點(diǎn),防止細(xì)胞附著,不受細(xì)胞的粘附性或懸浮條件優(yōu)化的影響,可有效分離單個B細(xì)胞并進(jìn)行分泌物檢測。

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圖2. H100六邊形納米孔板

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圖3. 孔板內(nèi)包被抗原的B 細(xì)胞分泌分析方案

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圖4. 微球和報告細(xì)胞的單B 細(xì)胞篩選方案

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可視化篩選和挑取過程

使用CellCelector 分離和表征原代B細(xì)胞。使用明場和熒光掃描52,000個納米孔,鑒定含有分泌抗體(AF647+)的B細(xì)胞且對EGFR結(jié)合呈陽性(AF488+)的B細(xì)胞納米孔。(A)熒光特異性647nm發(fā)射的圖像(紅色);含有抗體分泌細(xì)胞的兩個鄰近孔可以觀察到三個紅色熒光孔,表示它們分泌了目標(biāo)抗體(ASC)。(B)熒光特異性488nm發(fā)射的圖像(綠色);一個含有EGFR特異性ASC的鄰近孔兩個綠色的孔代表其分泌物能夠和EGFR結(jié)合。(C)來自647和488nm通道的圖像疊加和(D)用于挑取EGFR+ASC的明場圖像。從納米孔挑取EGFR+ASC之前和之后的明場圖像(E)和(F)挑取前后的明場圖像顯示納米孔內(nèi)所有的內(nèi)容物均已挑取。

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圖5. 細(xì)胞分泌分析示例[1]

總結(jié)

 

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傳統(tǒng)B細(xì)胞篩選

CellCelector B細(xì)胞篩選

費(fèi)時費(fèi)力、效率低下且成本高昂

使用自動化分析和分離流程,僅需一塊納米孔板即可實(shí)現(xiàn)上萬個單B細(xì)胞篩選,高效且節(jié)約

需要引入多種分析工具篩選單B細(xì)胞,并評估B細(xì)胞性能和產(chǎn)量

基于HT-NIC方法,在單次分析流程中即可對B細(xì)胞分泌物特異性及產(chǎn)量進(jìn)行評估,并有效回收分離

操作復(fù)雜,需要專業(yè)操作人員

高度集成的自動化流程減少人力投入,操作簡便

 

 

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提高臨床和生物治療研究及

抗體開發(fā)中 B 細(xì)胞工作流程的效率

下載文檔

-參考文獻(xiàn)-

[1] Matacho et al. (2022). Antibody Therapeutics, Volume 5, Issue 1, January 2022, Pages 11–17

 



 

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