Incucyte® 實時活細胞分析系統(tǒng)是一款革命性的細胞成像設(shè)備，可置于培養(yǎng)箱的穩(wěn)定環(huán)境中，對細胞進行數(shù)天、數(shù)周甚至數(shù)月的長期分析，其強大的功能、易于操作的界面、精準的多參數(shù)計算使得很多用戶對其愛不釋手，在細胞水平的體外實驗中有著廣泛應(yīng)用。截止至目前，應(yīng)用Incucyte® 發(fā)表的文章總數(shù)已經(jīng)超過了15,000篇！
近日，陳老師收集了2023年第四季度近30個單位發(fā)表的40余篇國內(nèi)文章（文獻列表見文末），就讓我們一起看看，哪個應(yīng)用最熱門吧。
北京航空航天大學(xué) | 1 | 中國科學(xué)院上海藥物研究所 | 1 |
南方醫(yī)科大學(xué) | 1 | 中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院 | 1 |
泉州師范大學(xué) | 1 | 濱州醫(yī)學(xué)院 | 1 |
重慶大學(xué) | 1 | 西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 | 1 |
中山大學(xué)附屬七院 | 1 | 華中科技大學(xué) | 1 |
重慶醫(yī)科大學(xué) | 2 | 暨南大學(xué) | 1 |
澳門大學(xué) | 4 | 上海仁濟醫(yī)院 | 2 |
上海交通大學(xué) | 2 | 浙江大學(xué) | 1 |
北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院 | 1 | 中山大學(xué)腫瘤防治中心 | 1 |
蘇州多瑪生物 | 1 | 南京中醫(yī)藥大學(xué) | 1 |
中國科學(xué)院水生生物研究所 | 1 | 復(fù)旦大學(xué) | 1 |
首都醫(yī)科大學(xué) | 1 | 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 | 1 |
百奧賽圖 | 4 | 華西醫(yī)院 | 1 |
中山大學(xué)附屬五院 | 3 | 沈陽藥科大學(xué) | 1 |
廣州生物島實驗室 | 1 | ||
表1. 2023 Q4 Incucyte® 文章第一作者單位分布
從文章的分布單位來看，很多單位在一個季度里就應(yīng)用Incucyte® 發(fā)表了多篇文章，比如中山大學(xué)附屬五院、澳門大學(xué)、百奧賽圖等。利用Incucyte® 可以高效地獲取實時細胞信息、快速獲得可信的研究成果，并且簡單易用，能在短時間內(nèi)生成多個精確數(shù)據(jù)，是文章發(fā)表的利器！也是實實在在可以買得起、用得好的儀器！
圖1. Incucyte® 應(yīng)用非常廣泛，從這些文章應(yīng)用方向上看，除了傳統(tǒng)的細胞增殖活性、劃痕遷移實驗，還有血管生成、3D拍攝等應(yīng)用。
接下來，陳老師就選幾篇帶有新應(yīng)用的國內(nèi)文章為大家一一介紹：
最多應(yīng)用
中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院
鼻咽癌新靶點[1]
自噬與鼻咽癌（NPC）放射耐藥有關(guān)。復(fù)制蛋白A1（RPA1）和RPA3是RPA復(fù)合物的底物，是逆轉(zhuǎn)鼻咽癌放射耐藥性的潛在治療靶點。然而，RPA在自噬中的作用尚未明確。為了揭示NPC細胞中RPA抑制劑（RPAi）藥理學(xué)和細胞毒性機制，以及RPAi介導(dǎo)的自噬調(diào)節(jié)NPC放射敏感性的潛在機制。文章鑒定了一種有效的RPAi（HAMNO），它在體外對NPC細胞系的放射敏感性增強和增殖抑制顯著相關(guān)。并發(fā)現(xiàn)RPAi通過誘導(dǎo)自噬流動、AMPK/mTOR通路激活和降低糖酵解功能的自噬相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄等多個水平上誘導(dǎo)自噬。將氯喹（CQ）治療或基因抑制自噬調(diào)節(jié)因子ATG5和RPAi治療相結(jié)合，可以協(xié)同抑制自噬，在增強NPC對輻射的抗腫瘤反應(yīng)方面比單獨使用任何一種方法更有效。本研究提出了一種新的治療策略，同時破壞RPA和自噬過程的藥理學(xué)抑制劑可提高鼻咽癌對輻射的反應(yīng)性。Incucyte® 在該文中被用來檢測腫瘤細胞、腫瘤球在藥物處理下的增殖、以及葡萄糖的內(nèi)吞等多個應(yīng)用。
圖2. 通過Incucyte® 檢測三種NPC細胞系的增殖發(fā)現(xiàn)，RPAi（HAMNO）可以加強放射治療IR的靈敏度
圖3. 通過2-NBDG指示劑和Incucyte® 檢測葡萄糖攝入，發(fā)現(xiàn)RPAi（HAMNO）可以抑制葡萄糖的攝入
圖4. 通過Incucyte® 檢測腫瘤球增殖發(fā)現(xiàn)，氯喹和RPAi（HAMNO）對腫瘤球成長的抑制具有協(xié)同作用
Incucyte® 可以拍攝和分析3D培養(yǎng)，比如腫瘤球和類器官。反正放在培養(yǎng)箱里拍攝，想拍多久就拍多久。
最新應(yīng)用
復(fù)旦大學(xué)
神經(jīng)退行性疾病新機制[3]
線粒體損傷的增加在許多神經(jīng)退行性疾病中起著關(guān)鍵作用，例如帕金森?。≒D）和唐氏綜合征（DS）。因此，小分子化合物增強線粒體降解可能為解決這些疾病提供有希望的新策略。這篇文章探索了通過自噬拴系化合物（ATTEC）將線粒體靶向自噬來誘導(dǎo)線粒體清除的策略。證明雙功能化合物（mT1）同時與線粒體外膜蛋白 TSPO 和自噬體蛋白 LC3B 結(jié)合，可能會增強自噬體對受損線粒體的吞噬和隨后的自噬降解。初步實驗表明，mT1 在 PD 細胞模型和 DS模型中都減弱了疾病相關(guān)表型。本文證明了雙功能ATTECs降解線粒體的可能性，這證實了ATTECs降解細胞器的能力，并為干預(yù)線粒體相關(guān)疾病提供了潛在的新策略。Keima 是一種對 pH 敏感的雙激發(fā)熒光蛋白，對溶酶體蛋白酶具有抗性。酸性pH值下在620 nm處具有單個發(fā)射峰。Mito-Keima 通過線粒體的色素 c 氧化酶亞基 VIII （COX VIII）的靶向序列在線粒體上特異性表達。mito-Keima 可以指示線粒體是否已進入溶酶體（pH 4.5）。本文通過Incucyte®和Keima來檢測線粒體自噬水平。
圖5. 通過Incucyte® 監(jiān)控紅色熒光發(fā)現(xiàn)，加入mT1抑制劑后，線粒體吞噬加強，但是敲除mT1的靶點TSPO再加入mT1后，mT1導(dǎo)致的線粒體吞噬減弱
只要有合適的熒光指示劑，Incucyte® 啥都能做！
最多數(shù)據(jù)
澳門大學(xué)
糖尿病新機制發(fā)現(xiàn)[3]
非程序性巨噬細胞極化，尤其是促炎性巨噬細胞的長時間激活，與糖尿病目標(biāo)的傷口愈合延遲有關(guān)。巨噬細胞來源的外泌體攜帶多種microRNA（miRNA），參與傷口愈合的不同階段。骨髓來源的原代巨噬細胞BMDM（M0-Exos）、干擾素γ加脂多糖極化 BMDM（M1-Exos） 和白細胞介素-4 極化 BMDM（M2-Exos） 中分離出外泌體。與 M0-Exos 相比，M1-Exos 損害了人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）的遷移和微管形成，而 M2-Exos 表現(xiàn)出相反的效果。共鑒定出 63 個 miRNA 在源自極化 BMDM 的外泌體中差異表達。其中，miRNA-155-5p在M1-Exos中高表達，阻斷了HUVECs的血管生成。此外，miRNA-155-5p 直接與生長分化因子 6（GDF6） mRNA 的 3′ UTR 結(jié)合以抑制其蛋白表達。這項研究破譯了極化巨噬細胞外泌體中miRNA的表達譜。M2樣巨噬細胞衍生的外泌體和miRNA-155-5p抑制劑可能是治療糖尿病足潰瘍的有前途的藥物。
圖6. 左圖為不同來源外泌體對HUVEC的增殖影響，分別從總分支長度、節(jié)點數(shù)等來進行統(tǒng)計；右圖為劃痕遷移實驗的結(jié)果
圖7. 左圖為miRNA-155-5p對HUVEC的劃痕遷移的影響；右圖為增殖實驗的結(jié)果，分別從總分支長度、節(jié)點數(shù)等來進行統(tǒng)計
本文章數(shù)據(jù)很多，Incucyte® 一次性可以掃描6塊板并提供劃痕工具，還可以迅速對劃痕平均距離等進行計算，大大提高了劃痕測試通量
為什么Incucyte® 那么火熱呢？
培養(yǎng)箱內(nèi)無限時間的連續(xù)觀察，最短幾分鐘的間隔拍攝，自動化的圖像采集，減少人力，防止過多操作對細胞的傷害
6個板位，分別獨立設(shè)置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高
高效簡便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標(biāo)多參數(shù)
> 100種優(yōu)化過的配套熒光試劑和耗材及詳盡的Protocol
活細胞監(jiān)測：優(yōu)化高級細胞模型的工作流程
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-參考文獻-
[1] Targeting RPA promotes autophagic flux and the antitumor response to radiation in nasopharyngeal carcinoma. Journal of Translational Medicine，2023
[2] Targeted clearance of mitochondria by an autophagy-tethering compound (ATTEC) and its potential therapeutic effects.Science Bulletin.Volume 68, Issue 23, 15 December 2023, Pages 3013-3026
[3] Exosomal miRNA-155-5p from M1-polarized macrophages suppresses angiogenesis by targeting GDF6 to interrupt diabetic wound healing.Molecular Therapy - Nucleic Acids.Volume 34, 12 December 2023, 102074
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