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Overview

藥品通常是根據(jù)嚴(yán)格的GMP指南生產(chǎn)的，作為批量放行前的保險措施，所有藥品都要經(jīng)過嚴(yán)格的無菌檢測，以確定是否存活微生物。Sterisart®是一種基于膜過濾法的無菌檢測封閉系統(tǒng)。該封閉系統(tǒng)不需要對膜過濾器進(jìn)行物理操作，從而可降低二次污染和假陽性的風(fēng)險。

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本篇《Sterisart®的隔膜可確保從封閉系統(tǒng)無菌檢測裝置中進(jìn)行可靠取樣》應(yīng)用說明評估了配有隔膜的Sterisart® 封閉系統(tǒng)無菌檢測裝置用于樣品反復(fù)無菌提取的性能。結(jié)果表明，即使在超過100 次重復(fù)的隔膜取樣操作（遠(yuǎn)遠(yuǎn)*可預(yù)見的取樣要求）之后，隔膜仍然完好無損，并且這些容器中包含的生長培養(yǎng)基仍然無菌。

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材料和方法

耗材

胰蛋白大豆肉湯（TSB）（Gila/BD）、硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM）（Gila/BD）、TSB（Merck）、FTM（Merck）、胰蛋白大豆瓊脂（TSA）（Merck）、玻璃反應(yīng)管 - 30 mL（Borosil）、針頭–0.90×70 mm、2OG×2?（Sterican–B.Braun）、注射器–F Luer（Omnifix–B.Braun）。

設(shè)備

Sterisart®，培養(yǎng)箱，Combisart® 三聯(lián)過濾支架，直排泵。

Sterisart® NF無菌試驗系統(tǒng)

16467--------GSD, 16475--------GSD, 16466--------GSD

膜過濾

在隔膜取樣試驗中，對來自三種隔膜類型的分別10個Sterisart® 料筒（總共 30 個）進(jìn)行了分析。

10個料筒中有一個（來自每種Sterisart® 容器類型）作為陰性對照。

在無菌條件下，在生物安全柜中往Sterisart®培養(yǎng)料筒中灌裝生長培養(yǎng)基。將兩個Sterisart®料筒放置在泵支架上，并使Sterisart®管路系統(tǒng)穿過泵頭。使用封閉的翼形螺母塞密封每個Sterisart®料筒的出口。兩個無菌通風(fēng)過濾器不加蓋。打開Y型分配器出口處的黃色管夾，并關(guān)閉相鄰的白色管夾。將雙針金屬釘插入裝有FTM的瓶子中，并開啟Sterisart®泵。將預(yù)定體積（75 ml）的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到第一個料筒中后，關(guān)閉泵。打開Y型分配器出口處的白色管夾，并關(guān)閉相鄰的黃色管夾。將雙針金屬釘插入裝有TSB的瓶子中，并開啟Sterisart®泵。將相似體積（75 ml）的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到第二個料筒中。使用培養(yǎng)料筒入口上方的兩個夾具密封管道，從而切斷管路。

將含有TSB的Sterisart®料筒在 22.5 °C下培養(yǎng) 24 天。其中TSB是用于檢測低發(fā)病率真菌和好氧細(xì)菌的推薦生培養(yǎng)基。將含有FTM的Sterisart®料筒在 32.5 °C下培養(yǎng) 24 天。其中FTM是用于培養(yǎng)需氧、微需氧和厭氧微生物的推薦生長培養(yǎng)基。

隔膜取樣

無菌條件下，在生物安全柜中從Sterisart®料筒中提取樣品。從Sterisart®培養(yǎng)料筒的頂部、中部和底部提取三個樣品，每個樣品 100 μl，每天提取兩次，共持續(xù) 17 天（3×2×17=102 個樣品）。將提取的樣品轉(zhuǎn)移到含有無菌液體培養(yǎng)基、FTM和TSB的玻璃反應(yīng)管中。含有TSB的小瓶在 22.5 °C下培養(yǎng) 14 天，含有FTM的小瓶在 32.5 °C下培養(yǎng) 14 天。通過對每個Sterisart®裝置和相應(yīng)的提取樣品進(jìn)行拍照，以便記錄結(jié)果。

微生物計數(shù)

使用放置在無菌Combisart®過濾裝置中的黑色的網(wǎng)格膜過濾器，并連接至直排泵，以進(jìn)行最后的檢查。在Sterisart®料筒中培養(yǎng) 24 天后，將 60 - 70 ml TSB填充到漏斗中，并通過黑色薄膜過濾器過濾。使用無菌鑷子將過濾器轉(zhuǎn)移到TSA板上，并將該板在 36 °C下培養(yǎng) 3 - 5 天。然后檢查這些板是否有微生物污染。

結(jié)果與討論

在 102 次隔膜穿孔并反復(fù)提取樣本后，確定所有Sterisart® 料筒（3 × 9 個含有FTM，3 × 9 個含有TSB；第 10 個料筒含有FTM和TSB作為各自的對照）均為無菌，且在 24 天后未檢測到微生物污染。（圖1）

同樣，所提取的樣品也是無菌的，沒有微生物生長，這表明Sterisart®隔膜可以實現(xiàn)高效和高度可靠的無菌取樣。（圖2）

圖1：重復(fù)提取樣品后無微生物污染。Sterisart® 16466 GSD 版本填充了TSB（A和B）或FTM（C和D），并分別在 22.5 °C和 32.5 °C下培養(yǎng) 24 天期間的代表性圖像。陰性對照顯示在A和C中。

為了進(jìn)行樣品提取，B和D中的料筒被穿孔 102 次。

圖2：從Sterisart®16466 GSD 提取的樣品在玻璃瓶中培養(yǎng)后沒有微生物污染。將樣品接種到含有TSB（上層板）和FTM（下層板）的玻璃瓶中，分別在22.5° C和32.5° C下生長 14 天。

當(dāng)隔膜被多次刺穿或使用了不合適的針型時，可能會發(fā)生“結(jié)晶"的情況。在某些Sterisart®料筒中，僅在 36 次穿孔后就觀察到微小顆粒。24 天后在黑色薄膜過濾器上收集這些顆粒，并監(jiān)測其在TSA板上形成菌落的能力。這些顆粒即使在培養(yǎng)五天后也沒有表現(xiàn)出任何生長跡象，這表明這些顆粒在本質(zhì)上不具生物活性。根據(jù)其形態(tài)，我們得出結(jié)論，這些惰性顆粒是在注射器針頭反復(fù)穿刺過程中從隔膜上剪下的橡膠碎片。這些碎片不會影響無菌試驗的效果，并且?guī)缀醪粫淙朐谏L培養(yǎng)基中。

結(jié)果表明，Sterisart® 料筒即使在連續(xù)提取 102 個樣品后，仍然是一個封閉且無菌的裝置。

結(jié)論

總而言之，該研究證明了Sterisart®隔膜的強大性能，即使在提取了 100 多個樣品后仍能保持完整的無菌環(huán)境。

在無菌檢測產(chǎn)品中，由于防腐劑和抗菌劑的存在，在很大程度上阻礙了依賴直接接種的快速檢測方法的采用。此類產(chǎn)品的膜過濾及隨后的膜沖洗可減少無菌檢測期間出現(xiàn)假陰性的風(fēng)險。通過膜過濾實現(xiàn)大體積分析，并實現(xiàn)樣品提取，從而為用戶提供了將封閉系統(tǒng)無菌檢測與快速無菌檢測方法相結(jié)合的能力。

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