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Overview

在樣品儲(chǔ)存和樣品制備過程中，化合物會(huì)從日常的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備中浸出。這些化合物會(huì)在HPLC、GC 和MS 的圖譜中引入不需要的鬼峰，并在包括分析質(zhì)量控制在內(nèi)的一系列活動(dòng)中干擾樣品分析。使用HPLC、GC-MS 和LC-MS，對賽多利斯Optifit 和Safetyspace®濾芯吸頭及其低吸附吸頭在移取易溶出樣品時(shí)的浸出物情況進(jìn)行了測試。這些移液器吸頭被證明實(shí)際上不含浸出化合物，因此適用于高度敏感的分析方法。


引言

塑料器具被廣泛用于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，但低品質(zhì)的產(chǎn)品可能會(huì)對高精度的分析產(chǎn)生影響。污染源可能是樣品管、微孔板、移液器吸頭和塑料注射器，它們可以浸出著色劑和增塑劑，如鄰苯二甲酸鹽或DiHEMDA( 二(2-羥yi基) 甲基十二烷基銨)，導(dǎo)致鬼峰并干擾分析結(jié)果。為避免出現(xiàn)鬼峰，許多實(shí)驗(yàn)室已將常用的一次性塑料器具更換為需要清潔和預(yù)潤洗的玻璃器皿。

在本研究中，使用高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)和液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)法，然后在乙醇和DMSO中萃取，從而對賽多利斯Optifit和Safetyspace® 濾芯吸頭及其低吸附吸頭的化學(xué)浸出物進(jìn)行分析。這些溶劑的選擇是基于它們的廣泛使用以及與較溫和的溶劑(如水)相比的腐蝕性，后者可能不會(huì)產(chǎn)生相同水平的潛在污染物。


方法

實(shí)驗(yàn)室設(shè)備相關(guān)的浸出物測試

使用100μl的1)乙醇或2)DMSO沖洗各種移液器吸頭（200μl Optifit 吸頭(產(chǎn)品編號(hào)790200)、Safetyspace®濾芯吸頭(產(chǎn)品編號(hào)790201F)和低吸附吸頭( 產(chǎn)品編號(hào)LH-L790200和LH-LF790201))，將溶劑吸入移液器吸頭，保持5秒鐘并直接分液到樣品試管中。使用多個(gè)相同類型的移液器吸頭(5個(gè)移液器吸頭，共500μL，混合樣品) 產(chǎn)生足夠的測試體積，通過HPLC-UV/VIS、GC-MS或LC-HRMS 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室設(shè)備相關(guān)的浸出物分析。

HPLC-UV/VIS

將乙醇提取物進(jìn)樣至配備Nucleosil C18(5μm × 250mm × 4.6mm) 色譜柱和紫外/可見光(UV/VIS) 檢測器的Agilent 1200 infinity(Agilent TechnologiesInc.，California，USA)HPLC系統(tǒng)。流速：1ml/min；波長：220nm；進(jìn)樣體積：20μl；溫度：40°C；流動(dòng)相：A) 乙腈 | B) 水

GC-MS

通過液- 液萃取制備乙醇和水提取物，并進(jìn)樣至Clarus 600GC-Clarus 600TMS Turbo(PerkinElmer Inc.，Massachusetts，USA) 和C18 Elite-5MS(60m×0.25mm×0.25μm) 色譜柱。通過使用內(nèi)標(biāo)2-氟聯(lián)苯(10μg/ml) 進(jìn)行液體注射，使用甲苯-d8(0.1μg/ml) 進(jìn)行頂空注射，進(jìn)行半定量。

LC-MS

將乙醇和DMSO提取物直接進(jìn)樣至配備BEH C18(1.7μm，2.1×100mm) 色譜柱的Waters ACQUITY UPLC I-Class-Waters Xevo G2-XS QTof(Waters Corp，Massachusetts，USA)LC-MS 系統(tǒng)中( 流速：0.5ml/min；進(jìn)樣體積：1μl；溫度：40°C；流動(dòng)相：A) 乙腈 | B) 含有10mmolNH4CH3COO 的水，梯度：0–0.5 分鐘 5% A，0.5-9分鐘 5% A，9-39.5 分鐘 99% A，39.5-40分鐘 5%A)。通過分別對空白樣品與樣品的堿基峰離子(BPI) 色譜圖，以及空白樣品與樣品的UV/VIS 色譜圖進(jìn)行目視對比，來進(jìn)行篩選。


結(jié)果

對賽多利斯Optifit和Safetyspace®濾芯吸頭及其低吸附吸頭進(jìn)行了GC-MS和LC-MS分析。通過GC-MS對油酰胺進(jìn)行定量，最大濃度為0.11ppm( 定量限，LOQ，0.01ppm；圖1)；使用LC-MS對芥酸酰胺( 圖2-3) 和bDtBPP( 雙(2,4-二叔丁基苯基)- 磷酸酯；圖4) 進(jìn)行定量，最大濃度為0.14ppm(LOQ 0.001ppm) 和.026ppm(LOQ，0.001ppm)。此外，在GC-MS中，對Optifit低吸附吸頭中的十六烷酸乙酯進(jìn)行定量，最大濃度為0.25ppm，檢測到一種保留時(shí)間為8.32分鐘的未知化合物，最大濃度為0.13ppm，但其結(jié)構(gòu)信息不足，因此無法對其進(jìn)行表征。在HPLC-UV/VIS 中，在Optifit低吸附吸頭中僅發(fā)現(xiàn)了少量普遍存在的抗氧化劑Irgafos 168(CAS 95906-11-9)。未檢測到超出其定量限的其他化合物(表1)。

圖1. 使用GC-MS對賽多利斯移液器吸頭EtOH提取物的化學(xué)浸出物進(jìn)行分析。保留時(shí)間：油酰胺，19.28分鐘；芥酸酰胺，22.66分鐘( 結(jié)果低于檢測限)；未知化合物，8.32分鐘；十六烷酸乙酯，25.20 分鐘；內(nèi)標(biāo)Irganox 1035，12.35分鐘。

圖2. 使用LC-HRMS(ESI+)對賽多利斯移液器吸頭EtOH提取物的化學(xué)浸出物進(jìn)行分析。保留時(shí)間：芥酸酰胺，9.84分鐘；內(nèi)標(biāo)Irganox 1035，9.27分鐘。

圖3. 使用LC-HRMS(ESI-)對賽多利斯移液器吸頭DMSO提取物的化學(xué)浸出物進(jìn)行分析。保留時(shí)間：芥酸酰胺，9.84分鐘；內(nèi)標(biāo)Irganox 1035，9.24分鐘。

圖4. 使用LC-MS(ESI+)對賽多利斯移液器吸頭EtOH提取物的化學(xué)浸出物進(jìn)行分析。保留時(shí)間：bDtBPP,6.97分鐘；內(nèi)標(biāo)Irganox 1035，9.26分鐘。

圖5. 使用HPLC-UV/VIS對賽多利斯移液器吸頭EtOH提取物的化學(xué)浸出物進(jìn)行分析。保留時(shí)間：Irgafos 168，40.17分鐘；內(nèi)標(biāo)Irganox 1035( 硫代二亞乙基雙[3-(3,5- 二叔丁基-4- 羥基苯基) 丙酸酯]，CAS 41484-35-9)，30.00分鐘。

結(jié)論

從賽多利斯移液器吸頭中定量的浸出物水平低于文獻(xiàn)中報(bào)告的每種化合物所報(bào)告的相關(guān)濃度(表1)。觀察到的具有抗炎作用生物學(xué)相關(guān)濃度：油酰胺，100ppm(Yang 2016)；芥酸酰胺，0.338ppm(Watson 2009)；bDtBPP 對CHO 細(xì)胞生長有抑制作用，濃度為0.035-0.1ppm(Kelly 2016)；DiHEMDA，0.03ppm(McDonald 2008)。

因此，在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室操作或生物分析樣品的制備中使用賽多利斯Optifit和Safetyspace® 濾芯吸頭及其低吸附吸頭，預(yù)計(jì)不會(huì)對敏感的生物或生化分析產(chǎn)生干擾。

表1. 賽多利斯移液器吸頭化學(xué)浸出物

* 低于定量限(LOQ)

? 低于檢測限(LOD)

? 沒有樣品的DiHEMDA 呈陽性，因此未確定LOQ

Optifit 吸頭和 Safetyspace濾芯吸頭

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《使用賽多利斯的無浸出物移液器吸頭避免 HPLC、GC 和 MS 色譜圖中的鬼峰》

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