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產(chǎn)品描述

Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）是一種聚合物磁性微球，由高質(zhì)量的鼠源IgG單克隆抗體與carboxyl magnetic beads通過供價偶聯(lián)制備，本產(chǎn)品具有快速的磁響應(yīng)性，超順磁性、良好的分散性、粒徑均一、極低的非特異結(jié)合和豐富的結(jié)合位點等特點，可用于帶有Flag標簽的蛋白免疫沉淀（IP）。

Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）可結(jié)合Met修飾的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag融合蛋白（Protein-FLAG）。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸和保存方法

冰袋運輸。2-8℃儲存。避免凍存！有效期1年。

注意事項

1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法

以免疫沉淀（IP）為例，步驟如下：

1樣品準備

樣品可以是細菌發(fā)酵液或者細胞裂解液， 樣品中不能含有顆粒不溶物，可以用0.22 μm濾膜過濾或10,000×g離心15 min。

2 磁珠預(yù)處理

2.1 用移液器輕柔吹打Anti-Flag免疫磁珠，使其充分混懸，取 25~50 µL 磁珠懸液置于1.5 mL離心管中。

2.2 加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer并輕輕移液器混合，用移液器輕柔吹打重懸Anti-Flag免疫磁珠，接著在磁力架上靜置1 min后，吸棄上清。

2.3 重復(fù)步驟 2.2 兩次。

3樣品的結(jié)合

3.1 在預(yù)處理后的磁珠中加入蛋白樣品，置于翻轉(zhuǎn)混合儀上孵育(常溫2 h，4 ℃過夜)；

3.2 將上述混合液置于磁力架上靜置1 min，然后把上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中備用(上清液可用于檢測Flag標簽蛋白是否存在殘留)，原離心管中剩余的即為 蛋白-磁珠復(fù)合物；

注意：結(jié)合過程中，磁珠可能會出現(xiàn)聚團或呈片狀，屬于正常現(xiàn)象，不會影響實驗結(jié)果。

4洗滌

4.1 向步驟3.2所得的蛋白-磁珠復(fù)合物中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer ，用移液器輕柔吹打重懸，接著在磁力架上靜置 1 min 后, 吸棄上清；

4.2 重復(fù)步驟4.1兩次，直至洗滌后的上清液OD280小于0.05為止；

注意：如上清液的OD280仍大于0.05，則適當(dāng)增加洗滌次數(shù)。

5蛋白洗脫

根據(jù)下游用途選擇洗脫方法。

5.1 Flag融合蛋白洗脫

1） 配制Flag多肽洗脫液：TBS中溶解Flag多肽，終濃度為0.2-1 mg/mL。

2） 分別加入100 μL Flag多肽洗脫液，4 ℃孵育 2 h-6 h（慢慢搖晃）

3） 分離磁珠上的磁珠并保存含有目標抗原的上清液。

4） 重復(fù)洗脫步驟一次以獲得更高的回收率

5.2 酸性洗脫（0.1 M Gly-HCl，pH 3.0）

1）加入100 μL 0.1 M Gly-HCl，pH 3.0，室溫孵育5-10 min（慢慢搖晃）。

2）分離磁珠上的磁珠并保存含有目標抗原的上清液。

3）中和低pH，每100 μL洗脫液加入20 μL中和緩沖液(1M Tris pH8.5)。最后的溶液可以用作樣品用于變性 SDS-PAGE。

5.3 用SDS-PAGE上樣緩沖液洗脫

如需直接檢測目的蛋白，則在上述洗滌過的蛋白-磁珠復(fù)合物中加入100 μL 1×SDS-PAGE上樣緩沖液，煮沸 5 min，冷卻至室溫并在磁力架上靜置 1 min 后，取上清進行 SDS-PAGE 檢測。