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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

UCF.ME^® UltraNuclease（全能核酸酶），又稱非限制性核酸內(nèi)切酶、廣譜核酸酶；是一種來源于Serratia Marcescen的非特異性核酸內(nèi)切酶，可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進(jìn)行切割，將核酸*消化成2-5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸，能夠在非常廣泛的條件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X-100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解各種形式的（雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀，天然或變性）DNA和RNA，廣泛用于去除生物制品中的核酸。后續(xù)也可以通過相應(yīng)的方法去除UCF.ME^® UltraNuclease。

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測（夾心ELISA）原理檢測變性與非變性的UCF.ME^® UltraNuclease全能核酸酶的殘留，用抗UCF.ME^® UltraNuclease的兔多克隆抗體包被微孔板，形成固相抗體，向固相抗體微孔板中加入UCF.ME^® UltraNuclease標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品，然后加入生物素（Biotin）標(biāo)記的Anti-UltraNuclease多抗，最后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素（SA‐HRP），形成抗體+ 抗原+抗體‐Biotin+ SA‐HRP復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加入TMB底物顯色；TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色并在酸的作用下最終轉(zhuǎn)換成黃色，顏色的深淺與樣品中UCF.ME^® UltraNuclease的量呈正相關(guān)。本試劑盒檢測定量范圍0.047-3 ng/mL；檢測下限：23.5 pg/mL。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。4℃保存，未開包裝的產(chǎn)品，一年有效。試劑打開后，有效期半年。千萬不可凍存。

配置好的試劑保存時間：1）稀釋后的洗滌緩沖液和稀釋緩沖液，4℃保存，有效期1周；2）標(biāo)準(zhǔn)品36701-C為液體，保存于4℃，有效期1年；3）配制好的檢測抗體、終止緩沖液，4℃保存，有效期1個月。

注意事項

1）試劑盒需在保質(zhì)期內(nèi)使用完畢。

2）禁止不同批次的相關(guān)試劑進(jìn)行混用。

3）本產(chǎn)品僅能夠應(yīng)用于檢測說明書中標(biāo)注的靶點(diǎn)抗原與樣本。其它應(yīng)用需經(jīng)使用者設(shè)計驗證后，根據(jù)結(jié)果評估使用的可靠性與準(zhǔn)確性。

4）本產(chǎn)品僅用于研究，不能用于臨床診斷或治療。

5）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

產(chǎn)品組分

使用說明

一、試劑準(zhǔn)備

使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復(fù)室溫。

1×Wash Buffer配制：濃縮液平衡至室溫，充分溶解，不要有結(jié)晶?；靹?，取50 mL 20×Wash Buffer至超純水中，然后定容到1 L；具體配制體積，可按照每次使用量進(jìn)行配制。

2. Detection Antibody配制：使用10000 r離心20s，然后用Dilution Buffer 2將檢測抗體稀釋至工作液濃度0.5 μg/mL。

3. HRP-conjugated Streptavidin配制：使用10000 r離心20s，然后用Dilution Buffer 2以1：5000稀釋至工作濃度使用。

4. 標(biāo)準(zhǔn)品曲線的配制：準(zhǔn)備8個無菌的1.5 mL離心管，按照標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次進(jìn)行標(biāo)記。移取994 μL Dilution Buffer 1至標(biāo)記為3 ng/ml的離心管中，其余各管移取500 μL，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品儲存液濃度計算3 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)移取的儲液體積，加至離心管中混勻，取500 μL至下一個標(biāo)記濃度的離心管中，混勻，進(jìn)行一系列2倍梯度稀釋標(biāo)品，起始最高濃度標(biāo)記3 ng/mL，低濃度為0.047 ng/mL，可按照下面的配制方法來進(jìn)行。每次試驗均需制備相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，不同試劑盒以及不同時間的標(biāo)準(zhǔn)曲線不能混用。樣本測試時，每個孔所需標(biāo)品量為100 μL，注意配制體積要高于所需體積，避免體積使用量不足。

表1 UCF.ME® UltraNuclease標(biāo)準(zhǔn)品體系配制（酶標(biāo)儀檢測0.047-3 ng/mL）*

二、實(shí)驗方法

使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復(fù)室溫。強(qiáng)烈建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品和待檢樣本進(jìn)行雙復(fù)孔測定。

1.試劑準(zhǔn)備：備好各種待測試劑、稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本。

2.標(biāo)條確定：計算待測樣本和標(biāo)準(zhǔn)品所需酶標(biāo)條，將酶標(biāo)條從鋁箔袋取出，剩余的酶標(biāo)條放回鋁箔袋中并封好袋口，低溫保存。

3.清洗酶標(biāo)板：用1×Wash Buffer（300 μL/孔）洗板三次，拍干酶標(biāo)板。洗板對試驗結(jié)果有重要影響，確保最后一次拍板沒有洗液殘留。

4.孵育樣本：加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本，100 μL/孔，確保15 min內(nèi)完成點(diǎn)樣，37℃孵育1 h。

5.清洗酶標(biāo)板：棄去孔中液體，加入1×Wash Buffer（300 μL/孔）洗板五次，拍干酶標(biāo)板。

6. Biotin-conjugated檢測抗體孵育：將預(yù)先配制至工作濃度的檢測抗體加入酶標(biāo)板中，100 μL/孔，37℃孵育1 h。

7.清洗酶標(biāo)板：棄去孔中液體，加入1×Wash Buffer（300 μL/孔）洗板五次，拍干酶標(biāo)板。

8. HRP-conjugated Streptavidin孵育：將預(yù)先配制至工作濃度的偶聯(lián)HRP親和素加入酶標(biāo)板中，100 μL/孔，37℃孵育40 min。

9.清洗酶標(biāo)板：棄去孔中液體，加入1×Wash Buffer（300 μL/孔）洗板五次，拍干酶標(biāo)板。

10.顯色：使用10 min將底物液恢復(fù)至室溫，將底物液TMB加入酶標(biāo)板中，100 μL/孔，37℃避光孵育15 min。

11.終止：加入50 μL/孔終止液至酶標(biāo)板中，輕輕震動酶標(biāo)板至顯色均勻。

12.讀值：20 min內(nèi)讀取450 nm的光吸收值。

二、結(jié)果分析

1. 如果待測樣本OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點(diǎn)OD值，需將樣本進(jìn)行稀釋后重新測定。

2. 曲線制定：根據(jù)UCF.ME® UltraNuclease全能核酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即最終的讀數(shù)，也可以不用減去空白孔的OD值）采用二次曲線回歸擬合，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（X-標(biāo)準(zhǔn)品濃度ng/mL；Y-最終的OD450 nm），推薦使用ELISACalc.exe回歸/擬合計算軟件。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品中全能核酸酶濃度。

附件1：標(biāo)準(zhǔn)品配置流程簡圖

附件2：示例數(shù)據(jù)

以下標(biāo)準(zhǔn)曲線圖僅供參考，應(yīng)以同次實(shí)驗標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線計算標(biāo)本含量

附件3：實(shí)驗步驟流程簡圖

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HB210907