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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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36224ES60高靈敏度化學(xué)發(fā)光底物
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 36224ES60 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：945更新時間：2022-03-21 16:22:07
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 36224ES60 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格（元） |
SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate zui高靈敏度化學(xué)發(fā)光底物 | 36224ES60 | 100ml | 4℃ | 1557 |
36224ES70 | 200ml | 4℃ | 2857 | |
36224ES76 | 500ml | 4℃ | 5857 |
產(chǎn)品描述
翊圣SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。其原理是，蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，以一抗及HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合膜上的目的蛋白，或以HRP標(biāo)記的探針直接或間接結(jié)合膜上的核酸。洗膜后用本產(chǎn)品配制的ECL工作液，室溫孵育膜數(shù)分鐘，將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒。然后轉(zhuǎn)入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數(shù)秒到數(shù)小時，顯影定影后蛋白質(zhì)或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上。
本試劑盒采用了*的發(fā)光/增強底物系統(tǒng)，降低曝光背景的同時引入新型的氧化劑，大大提高試劑盒的穩(wěn)定性，可實現(xiàn)低飛克級的免疫印跡檢測。除用于X光片，還可用于自動成像系統(tǒng)。
產(chǎn)品特點
1）具有*靈敏度和高信噪比，可檢測低飛克級抗原；
2）持續(xù)發(fā)光時間長，熒光可使X光膠片感光達(dá)8小時以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測；
3）可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)，大大節(jié)省抗體：
一抗（儲液濃度1mg/ml）稀釋倍數(shù)：1:5000-1:100000；
二抗（儲液濃度1mg/ml）稀釋倍數(shù)：1:100,000-1:500,000。
產(chǎn)品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | ||
36224ES60（100ml） | 36224ES70（200ml） | 36224ES76（500ml） | ||
36224-A | MaxiSignal ECL-A液 | 50ml | 100ml | 250ml |
36224-B | MaxiSignal ECL-B液 | 50ml | 100ml | 250ml |
運輸與保存方法
常溫運輸。4 oC保存。【注】：A液（36224-A）需避光保存！有效期1年。
操作方法
【較理想的Western blot 結(jié)果需要優(yōu)化所涉及的各個實驗環(huán)節(jié)，如樣品上樣量、凝膠類型、轉(zhuǎn)膜方法、膜類型、封閉試劑、一抗?jié)舛?、二抗?jié)舛燃跋鄳?yīng)孵育時間等。另外，每個環(huán)節(jié)盡量提供足量的孵育試劑，以避免膜干燥?！?/span>
1. 執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記抗體或者HRP標(biāo)記核酸探針孵育、洗膜。
【注】：ECL發(fā)光液是HRP的顯色底物，因此檢測系統(tǒng)zui終必須基于HRP酶標(biāo)記抗體或者核酸探針。
2. zui后一次洗膜的同時，新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的A液和B液，混勻后，室溫放置備用。
【注】：取A液和B液一定要用不同的槍頭；
3. 用平頭鑷取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液，勿使膜*干燥。將膜*浸入發(fā)光工作液（100~200μl發(fā)光工作液/cm2膜）中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3-5分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。
【注】：孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，也會導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小，但勿降低發(fā)光液使用比例。
4. 用平頭鑷子夾起膜，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，去除膜上多余的液體，留下少量工作液，不可讓膜*干燥。不可洗去發(fā)光液。
5. 在X光膠片暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將印跡膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包裹印跡膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。
6. 暗房內(nèi)取一張X光膠片至于包裹的膜上，壓片，分別曝光不同的時間，如數(shù)秒到數(shù)分鐘，定影顯影沖洗。【注】：曝光時間需根據(jù)曝光強度做相應(yīng)的調(diào)整。若是背景過高，可使用兩張X光膠片同時壓片。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）步驟1～5可在日光燈下操作；但發(fā)光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈。
3）長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
4）發(fā)光工作液孵育約3-5分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續(xù)數(shù)小時并使X光膠片感光，因此弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。
5）由于發(fā)光液靈敏度高，強烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗（儲液濃度1mg/ml）稀釋倍數(shù)：1:5000-1:100000；二抗（儲液濃度1mg/ml）稀釋倍數(shù)：1:100,000-1:500,000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失敗。
6）某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。
7）避免將多張膜置于同一個洗膜盒內(nèi)洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
8）使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。
9）使用生物素-親和素系統(tǒng)，避免使用牛奶封閉，可能會導(dǎo)致背景過高。
10）金屬氧化物顆?？赡軙斐赡ど铣霈F(xiàn)顆粒狀斑點，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。
11）（NaN3）能抑制HRP活性，若回收HRP標(biāo)記探針或者抗體應(yīng)避免使用NaN3。
12）本品無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。
附 常見問題及解答
膠片成像相反（如白色條帶，黑色背景） | 檢測體系HRP過量 | 進(jìn)一步稀釋HRP偶聯(lián)試劑。 |
膜上呈現(xiàn)棕色或黃色條帶 | ||
避光條件下膜上具有發(fā)光斑點 | ||
信號持續(xù)時間少于8h | ||
信號較弱 | 檢測體系HRP過量導(dǎo)致消耗更多底物，導(dǎo)致信號減弱 | 進(jìn)一步稀釋HRP偶聯(lián)試劑。 |
抗原抗體量較少 | 增大抗體和抗原的使用量。 | |
轉(zhuǎn)膜效果不佳 | 優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件，提高轉(zhuǎn)膜效率。 | |
HRP酶活力或底物活力下降 | 于暗室中準(zhǔn)備1-2ml 本品制備的發(fā)光液，關(guān)燈后，加入1µl待檢測 HRP 標(biāo)記物，該混合液會立即產(chǎn)生藍(lán)色的光，且在后繼幾分鐘內(nèi)消退。如果沒有，請檢測另1支HRP標(biāo)記物進(jìn)行進(jìn)一步檢測。 | |
背景較高 | 檢測體系HRP過量 | 進(jìn)一步稀釋HRP偶聯(lián)試劑。 |
封閉不充分 | 優(yōu)化封閉條件。 | |
封閉劑不合適 | 換用合適的封閉劑。 | |
清洗不充分 | 增加清洗此時，延長清洗時間。 | |
膠片曝光過度 | 降低曝光時間。 | |
抗原或抗體濃度較高 | 降低抗原抗體使用量。 | |
抗體質(zhì)量差 | 換用高質(zhì)量抗體。 | |
蛋白條帶內(nèi)有斑點 | 轉(zhuǎn)膜不充分 | 優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件。 |
膜水化不充分 | 按照廠家說明書優(yōu)化膜的水化條件。 | |
膜和膠片間存在氣泡 | 趕走氣泡。 | |
曝光膠片上呈現(xiàn)斑點背景 | HRP標(biāo)記物形成聚合物 | 用0.2um濾膜過濾HRP標(biāo)記物。 |
非特異性條帶 | 檢測體系HRP過量 | 進(jìn)一步稀釋HRP偶聯(lián)試劑。 |
SDS造成非特異性結(jié)合 | 轉(zhuǎn)膜后洗膜，去除SDS。 | |
抗體質(zhì)量差 | 換用高質(zhì)量抗體。 | |
封閉不充分 | 延長封閉時間或換用合適封閉劑。 |
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