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臺盼藍染色液 Typan Blue Solution

臺盼藍（Trypan Blue），一種偶氮、親水性酸性藍色染料，可透過死亡細胞和垂死細胞的細胞膜，將其染成藍色，而活細胞由于其細胞膜的完整性，可將臺盼藍排斥在外，因此，通過顏色的變化即可將活細胞（活細胞呈透明無色）和死細胞鑒別開來，基于此原理，本品廣泛用于細胞活性水平的常規(guī)評估。臺盼藍還可染色膠原和淀粉樣蛋白。臺盼藍與蛋白結合形成的復合物可發(fā)出紅色熒光。另外，臺盼藍（合適濃度）還常用來淬滅細胞表面的自熒光或者其他熒光信號。

本品為溶于生理鹽溶液的0.4%（w/v）臺盼藍染色液，以無菌形式提供，細胞培養(yǎng)級別。

運輸和保存方法

室溫運輸和保存即可，二年有效。

注意事項

1）細胞計數(shù)前，需要用生理鹽緩沖液或者無血清培養(yǎng)基對細胞進行充分的清洗，因為細胞對血清蛋白具有非常高的親和力，殘留的血清蛋白會導致較暗的染色背景。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）對于懸浮細胞，離心收集細胞，充分清洗后，用適當緩沖液如PBS，HBSS重懸制成單細胞懸液；對于貼壁細胞，先用胰|酶消化細胞，再按照懸浮細胞的方法制備單細胞懸液。

2）取0.5ml單細胞懸液，按照1:1比例與0.5ml 0.4%臺盼藍染色液充分混勻，室溫染色3~10min。

【注1】：因臺盼藍具有細胞毒性，染色時間過久會導致部分死細胞染色，干擾計數(shù)。

【注2】：若細胞密度比較高，可取0.2ml單細胞懸液，經(jīng)適當緩沖液稀釋到0.5ml，之后再用0.5ml 0.4%臺盼藍染色液染色。

3）取少量上述染色細胞加入血細胞|計數(shù)板，于顯微鏡低倍鏡下計數(shù)，分別計算著色細胞（即損傷細胞和死細胞）和總細胞。

【注1】：用移液槍加染色細胞時，沿著蓋玻片的邊緣輕輕加液使其*覆蓋住整個小室。不可過量加液或者不足量。

【注2】：1mm2方格內(nèi)細胞數(shù)通常控制在20-50 cells，當細胞數(shù)超過200個，需重新調(diào)整稀釋倍數(shù)。

4）按照以下公式來計算細胞數(shù)目和活細胞百分比，

a，計算每ml細胞數(shù)目：Cells/ml=1mm2大方格內(nèi)的平均細胞數(shù)×稀釋倍數(shù)×104；【注】：此時的稀釋倍數(shù)為：步驟2所取的單細胞懸液與臺盼藍染色液混合后的稀釋倍數(shù)

b，總細胞數(shù)目：Total cells=（Cells/ml）×zui初制備單細胞懸液的總體積

c，細胞活力值：Viability（%）=（總細胞數(shù)-總著色細胞數(shù)）/總細胞數(shù) ×100

【注】：通常情況，健康的對數(shù)期培養(yǎng)細胞，活細胞至少占到95%。

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