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顯微鏡的分類和用途
顯微鏡
顯微鏡 將微小物體或物體的微細部分高倍放大,以便觀察的儀器或設備。
它廣泛應用于工農業(yè)生產及科學研究。生物學和醫(yī)學工作者在業(yè)務中也經常使用顯微鏡。大致分為光學顯微鏡和電子顯微鏡。
光學顯微鏡 即以可見光為光源的顯微鏡。普通的光學顯微鏡在結構上可分為光學系統和機械裝置兩個部分。光學系統主要包括目鏡、物鏡、聚光器、光闌及光源等部分。機械裝置主要包括鏡筒、鏡柱、載物臺、鏡座、粗細調節(jié)螺旋等部分(圖1 [光學顯微鏡])。其基本光學原理如圖2[光學顯微鏡成像原理模式圖],圖中左邊小的凸透鏡代表短焦距的一組透鏡,稱物鏡。右邊大的凸透鏡代表長焦距的一組透鏡,稱目鏡。被觀察的物體(AB)放在物鏡焦點(f)稍外的地方。物體的光線通過物鏡后在目鏡焦點(f)稍內方形成一個倒立的放大實像(BA)。觀察者的眼睛通過目鏡將該實像(BA)進一步放大為一個倒立的虛像(BA)。 目鏡位于顯微鏡筒的上方,一般由兩個凸透鏡構成。它除了進一步擴大物鏡所形成的實像之外,也限制了眼睛所觀察的視野。按放大率分,常用目鏡有5倍、10倍和15倍三種。 物鏡一般位于顯微鏡筒的下方,接近所觀察的物體。由8~10片透鏡組成。其作用一是放大(給物體造成一個放大的實像),二是保證像的質量,三是提高分辨率。常用物鏡可按放大率分為低倍 (4×)、中倍(10×或20×)、高倍 (40×)和油浸物鏡(100×)。多個物鏡共同鑲在換鏡轉盤上,可以按需要轉動轉盤選擇不同倍數的物鏡。 顯微鏡的放大倍數為目鏡倍數乘物鏡倍數,如目鏡為10倍,物鏡為40倍,則放大倍數為40×10倍(放大400倍)。優(yōu)良的顯微鏡可放大2000倍,可分辨相距1×10cm的兩點。 當白光通過凸透鏡時,波長較短的光(藍紫色),其折射度大于長波長的光(紅橙色),因此,成像時在像周出現各色光譜圍繞,并且有一圈藍色或紅色的輝光,這種顏色上的缺陷稱為色差。由于光線進入(和離開)透鏡鏡面各部分的角度不同,從透鏡四周透過的光線與從透鏡中心透過的光線相比,其折射角度較大。因此,成像時在像周出現模糊而歪曲的影像。這種成像面彎曲的缺陷稱為球面差。一系列形狀、結構和距離不同的凸和凹透鏡組互相配合,便能zui大限度地糾正色差和球面差,形成一個明亮、清晰而準確的影像。這就是目鏡或物鏡分別由一組透鏡構成的緣故。這種透鏡稱為平場消色差透鏡。 光線從一種介質(如空氣)投射到另一種較為致密的介質(如玻璃)中時會彎向“法線”(與介質交界面垂直的一條線),如圖3 [光線通過物鏡時的情況]中的BOA線。光線由致密介質(玻璃)進到不致密介質(空氣)中時會偏離“法線”,如AOB線(圖3a)當光線穿過聚光鏡玻璃(折射率為1.51)進入空氣時同樣會偏離,向外折射,因此進入物鏡的光量減少很多,像的分辨力也降低。使用100倍物鏡時,如果在物鏡和蓋玻片之間充以油液(折射率同樣為1.51)以隔絕空氣,則光線幾乎可以不折射地進入物鏡,這就增加了像的亮度和分辨率。這種物鏡稱為油浸物鏡(圖3b)。 聚光器位于顯微鏡臺的下方,可會聚來目光源的光線,將光量集中于標本,使標本受到光強適度的均勻照射。聚光器的下端裝有孔徑光闌(光圈)以控制光束的粗細。 普通光學顯微鏡的照明光源位于聚光器的下方,為特制的照度均勻的強光燈泡,并且配有可變電阻,可以改變光線的強度。 由于普通光學顯微鏡的光源光線自鏡體下方向上透射,通過聚光鏡、物鏡,達到目鏡,因此在醫(yī)學及生物學研究中必須將被觀察的樣品切成能透過光線的、厚約6m 的薄片,并且要進行染色以顯示不同的組織和細胞等細微結構。整個加工過程稱常規(guī)組織制片技術,包括選取適當的組織材料經甲醛(福爾馬林)液固定,逐級酒精脫水,石蠟包埋,用切片機將組織切成薄片裱在玻璃片上,再經蘇木素―伊紅染料著色,zui后將組織玻片封固在光學樹脂膠內。制好的組織玻片可長期保存。 顯微鏡的目鏡和物鏡安裝在鏡筒的兩端,它們的距離是固定的。將組織玻片放在載物臺上,旋轉粗調螺旋使載物臺接近物鏡。組織切片進入物鏡*焦平面,目鏡內即可見標本內的組織影像。然后用細調螺旋使目鏡內的影像清晰即可進行觀察。改換放大倍數時就要調換目鏡或物鏡。
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